人類巨細(xì)胞病毒對(duì)臍血多向、巨核系造血祖細(xì)胞體外增殖的影響及干預(yù)研究.pdf

1、目的: 本課題主要探討人類巨細(xì)胞病毒(HCMV)對(duì)臍血多向造血祖細(xì)胞集落形成單位（CFU-Mix）和巨核系祖細(xì)胞集落形成單位（CFU-Mk）形成的影響及作用機(jī)制，并用更昔洛韋（GCV）和黃芪(MMR)作用于HCMV感染的CFU-Mix、CFU-Mk，探討GCV和MMR對(duì)HCMV感染所致CFU-Mix、CFU-Mk體外增殖抑制的影響。方法: 1.采用造血祖細(xì)胞集落形成分析方法，在體外培養(yǎng)造血祖細(xì)胞，以HCMV-AD169株作為攻擊病毒，持

2、續(xù)感染臍血CFU-Mix、CFU-Mk，觀察、計(jì)數(shù)HCMV-AD169感染后CFU-Mix、CFU-Mk集落數(shù)、集落抑制率、集落峰期及維持時(shí)間。2.采用Giemsa-Wright和過(guò)氧化物酶染色法鑒定集落細(xì)胞成分。3.采用MTT法分別檢測(cè)MMR和GCV對(duì)臍血單個(gè)核細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用，以確定造血祖細(xì)胞對(duì)MMR和GCV的最大耐受濃度(MTC)。4.在1：10HCMV組中，將GCV和/或MMR作用于HCMV-AD169感染后的CFU-Mix、

3、CFU-Mk，分別計(jì)數(shù)其集落數(shù)、集落增殖提高率、集落峰期及維持時(shí)間。5.用PCR和熒光定量PCR 技術(shù)檢測(cè)CFU-Mix、CFU-Mk集落細(xì)胞內(nèi)HCMV-AD169 DNA。結(jié)果：1．經(jīng)MTT法測(cè)得造血祖細(xì)胞對(duì)MMR和GCV的最大耐受濃度(MTC) 分別為50μg/ml和7.5μg/ml。2.與空白對(duì)照組比較，滅活對(duì)照組CFU-Mix和CFU-Mk集落無(wú)明顯減少，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與空白對(duì)照組和滅活對(duì)照組比較，1：10、1：100、1：

4、1000 HCMV感染組CFU-Mix、CFU-Mk集落數(shù)均明顯減少，集落維持時(shí)間縮短，且呈劑量依賴關(guān)系，病毒感染濃度越高，CFU-Mix、CFU-Mk集落數(shù)下降幅度越大，集落維持時(shí)間縮短越明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但對(duì)各濃度組集落出現(xiàn)高峰的時(shí)間無(wú)明顯影響。1：10、1：100、1：1000 HCMV感染組與滅活對(duì)照組比較，CFU-Mix集落抑制率依次為55.2％、35.1％、20.3％，CFU-Mk集落抑制率依次為46.7％、29.7％

5、、14.5％。3.用PCR和熒光定量PCR在CFU-Mix、CFU-Mk集落細(xì)胞內(nèi)均檢測(cè)到有HCMV-AD169 DNA存在，而空白對(duì)照組和滅活對(duì)照組則為陰性。4.在1：10 HCMV組中加入MMR和/或GCV后, CFU-Mix、CFU-Mk集落數(shù)與1：10HCMV組比較均有明顯增加，集落維持時(shí)間延長(zhǎng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但各濃度組集落出現(xiàn)高峰的時(shí)間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。熒光定量PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，在1：10HCMV組中加入MMR和/或GCV后

6、, CFU-Mix、CFU-Mk集落細(xì)胞內(nèi)HCMV-AD169DNA copies有下降趨勢(shì)。MMR和GCV聯(lián)合應(yīng)用較單用藥組作用更加明顯。結(jié)論：1.多向、巨核系造血祖細(xì)胞是HCMV-AD169的主要靶細(xì)胞之一，在體外HCMV-AD169對(duì)多向、巨核系造血祖細(xì)胞的增殖、分化和集落形成有明顯抑制作用。2.HCMV能直接感染多向、巨核系造血祖細(xì)胞，并使之受到損傷，此作用可能與臨床HCMV感染患兒出現(xiàn)貧血、粒細(xì)胞減少及血小板減少有關(guān)。3.在體