當歸多糖對小鼠骨髓基質(zhì)細胞黏附分子表達及其黏附功能的影響.pdf

1、骨髓基質(zhì)細胞(bone marrow stromal cell，BMSC)是造血微環(huán)境的主要組成部分，一方面通過分泌體液因子調(diào)控造血；另一方面，通過細胞間的直接接觸作用于造血干/祖細胞(hematopoietic progenitor/stemcell，HSPC)的各個階段，BMSC與造血細胞之間的直接接觸是通過其表面的粘附分子來實現(xiàn)的，對造血細胞的增殖與分化起直接支持作用，并且參與HSPC的動員和歸巢，其結構和功能的完整性對于保護機體

2、造血的穩(wěn)定性具有十分重要的作用。粘附分子分為整合素家族、選擇素家族及免疫球蛋白基因超家族等多種。其中細胞間粘附分子-1(intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1，CD54)和血管細胞粘附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1，VCAM-1，CD106)是免疫球蛋白基因超家族中最常表達的兩種粘附分子，在介導BMSC對造血細胞的粘附及二者間的信息傳遞方面起重要作用

3、。VCAM-1和ICAM-1有多種功能：能協(xié)助造血細胞粘附定位于利于發(fā)育的微環(huán)境；參與造血細胞與基質(zhì)細胞形成多聚體；參與HSPC的動員。近年來，VCAM-1、ICAM-1等黏附分子已成為研究的熱點。 當歸作為中醫(yī)“補血、活血”要藥已有數(shù)千年的臨床應用歷史。研究表明：當歸多糖(Angelica polysaccharides,APS)是當歸中促進造血的有效成分，對正?；蜇氀∈蟮乃柘翟煅婕毎?BFU-E、CFU-E、CFU-GM

4、和CFU-MK)的增殖分化有顯著的促進作用；同時APS在體外可促進人紅系、粒單系及混合系造血祖細胞的增殖與分化。前期實驗已經(jīng)證實：APS對小鼠HSPC有一定的動員作用，與重組人粒細胞集落刺激因子(recombinate human granulocyte colony-stimulating factor,rhG-CSF)聯(lián)合動員的效果好于單用APS或單用rhG-CSF的動員效果，并且APS動員的小鼠HSPC能夠重建造血衰竭小鼠長期造血

5、。目前關于BMSC在造血干細胞(hematopoietic stem cell，HSC)動員中的作用已有很多報道。但是APS的動員機制還未見報道，其動員作用是否是通過改變粘附分子如ICAM-1和VCAM-1的表達及其黏附功能來實現(xiàn)有待進一步深入探討。這一研究結果將為改善骨髓造血微環(huán)境，促進HSPC的動員提供新的思路。 本研究以BAL,B/c小鼠為實驗動物模型，分為兩個部分進行實驗研究：1.細胞密度和血清對小鼠BMSC體外生長的影

6、響。2.APS對小鼠BMSC生長、黏附分子表達及其黏附功能的影響。本研究旨在探討APS促進造血以及參與HSPC動員的可能機制，其深入研究將為進一步開發(fā)和利用當歸提供理論與實驗依據(jù)。 1.細胞密度和血清對小鼠BMSC體外生長的影響 目的：研究不同細胞接種密度、血清濃度及種類對小鼠BMSC體外生長的影響。 方法：設置不同細胞密度、不同種類血清及血清量的培養(yǎng)體系，觀察小鼠BMSC的貼壁情況，細胞80％貼壁時間，用臺盼藍

7、排斥試驗檢測活細胞率，MTT法檢測細胞增殖情況，HE染色光鏡下觀察細胞形態(tài)。 結果： 1.原代全血培養(yǎng)的小鼠BMSC適宜接種密度為(1～4)×106/mL。 2.細胞最適生長的血清濃度為10％～20％。 3.與胎牛血清相比馬血清對小鼠BMSC的促增殖作用更好(P＜0.05)。 4.不同種類血清培養(yǎng)的小鼠BMSC類型有一定差異(P＜0.05)。 結論：不同細胞接種密度及血清濃度和血清種類對小

8、鼠BMSC體外生長有一定影響。 2.當歸多糖對小鼠BMSC黏附分子表達和黏附功能的影響 目的：研究APS對小鼠BMSC增殖、粘附分子ICAM-1和VCAM-1的表達及其對骨髓單個核細胞黏附功能的影響。 方法：觀察APS對小鼠BMSC消化時間的影響；MTT法檢測APS對小鼠BMSC增殖及對骨髓單個核細胞黏附功能的影響；流式細胞術檢測APS體內(nèi)外對小鼠BMSC表面黏附分子ICAM-1和VCAM-1表達的影響。

9、 結果： 1.100，200 mg/L，APS使BMSC達80％貼壁后消化時間明顯縮短(P＜0.05)。 2.50，1 00 mg/L APS組BMSC增殖能力較強(P＜0.05)。 3.體外培養(yǎng)中加入200，300 mgm APS能使BMSC表面ICAM-1表達降低；加入50，100，200，300 mg/L APS均可使VCAM-1表達降低(P＜0.05)。小鼠體內(nèi)腹腔注射1，2，4，6 mg/kg APS均

10、可使ICAM-1、VCAM-1表達比對照組降低(P＜0.05)。 4.100，200，300 mg/L APS使小鼠BMSC對骨髓單個核細胞黏附率減弱(P＜0.05)。 結論：APS能促進小鼠BMSC增殖，降低其表面黏附分子ICAM-1和VCAM-1的表達，進而使小鼠BMSC達80％貼壁后消化時間明顯縮短，對骨髓單個核細胞的黏附率減弱。 綜上所述，APS能促進小鼠BMSC增殖，降低黏附分子ICAM-1和VCAM-