間充質(zhì)干細胞對K562細胞增殖與凋亡的影響.pdf

1、【研究背景】造血微環(huán)境不僅影響到正常造血細胞的生長、分化與凋亡，而且影響到造血系統(tǒng)腫瘤細胞的增殖與凋亡。對于白血病治療的研究，不能僅限于對白血病細胞的研究，也需要對支持其生長的造血微環(huán)境進行研究。造血微環(huán)境包括細胞成分、可溶性因子與細胞外基質(zhì)。白血病的造血微環(huán)境出現(xiàn)的異常，可能參與了疾病進展的過程。間充質(zhì)干細胞，這種多能性的間質(zhì)來源的細胞，能夠產(chǎn)生多種正性與負(fù)性的生長調(diào)控因子，參與構(gòu)成了造血微環(huán)境。在Lewis肺癌、B16黑色素瘤細胞、

2、結(jié)腸癌細胞以及膠質(zhì)瘤的研究中發(fā)現(xiàn)，間充質(zhì)干細胞具有抑制腫瘤生長的特性[6,7,8]。一些研究報道間充質(zhì)干細胞(MSCs)表達的一些因子，能夠?qū)δ[瘤細胞產(chǎn)生抑制作用。Aoyagi等人發(fā)現(xiàn)骨髓基質(zhì)細胞能抑制K562白血病細胞的生長[14]。研究利用間充質(zhì)干細胞分泌一些負(fù)性調(diào)控因子，糾正白血病細胞生長的微環(huán)境，改變白血病細胞失控增殖的特性，對于改進白血病的治療具有重要意義。間充質(zhì)干細胞是否對于白血病細胞增殖能起到抑制的作用，需要進一步的驗證。

3、對于MSCs對于白血病細胞周期的影響、凋亡的影響還了解的較少，需要進一步的研究。 【實驗?zāi)康摹坑^察間充質(zhì)干細胞在體外是否具有抑制K562白血病細胞增殖的作用；了解MSCs對于K562白血病細胞周期和細胞凋亡的影響，觀察MSCs對于K562白血病細胞集落形成能力的影響。探討介導(dǎo)間質(zhì)干細胞抑制K562增殖的機制，為進一步研究間充質(zhì)干細胞的生物學(xué)特性打下一定基礎(chǔ)。 【實驗方法】分離培養(yǎng)胎肺來源的間充質(zhì)干細胞(MSCs)，建立K

4、562細胞與MSCs共培養(yǎng)的transwell體系，或是收集MSCs條件培養(yǎng)基(conditionedmedium)加入K562培養(yǎng)液中。分別采用臺盼藍拒染法、MTT法檢測MSCs對K562細胞增殖的作用。利用碘化丙錠(PI)標(biāo)記，流式細胞術(shù)(FCM)檢測MSCs對于K562細胞的細胞周期分布的影響。利用AnnexinV-FIFC和碘化丙錠(PI)雙標(biāo)記，流式細胞術(shù)檢測MSCs對于K562細胞自發(fā)凋亡的作用。采用軟瓊脂集落形成試驗檢測M

5、SCs的條件培養(yǎng)基對K562細胞的集落形成能力的影響。 【實驗結(jié)果】臺盼藍拒染法、MTT法檢測的結(jié)果都顯示與MSCs共培養(yǎng)或是在含有MSCs條件培養(yǎng)基的培養(yǎng)體系中，K562細胞的增殖受到抑制。細胞周期分析的結(jié)果顯示與MSCs共培養(yǎng)后的K562細胞的G1期細胞比例增高，S期細胞減少。 凋亡檢測的結(jié)果顯示MSCs能抑制K562白血病細胞的自發(fā)凋亡。軟瓊脂集落形成試驗的結(jié)果顯示MSCs條件培養(yǎng)基使K562細胞集落形成能力降低。