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1、目的:探討通過載體在體外培養(yǎng)的細(xì)胞中表達(dá)發(fā)夾狀siRNAs對(duì)HBV基因表達(dá)的抑制作用.方法構(gòu)建表達(dá)針對(duì)HBV S基因的mRNA的發(fā)夾狀siRNAs的質(zhì)粒pSilencer2.1-U6-S,并與ayw亞型HBV全基因組表達(dá)質(zhì)粒-pCMV-HBV30共轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的HepG2細(xì)胞,用半定量RT-PCR分析目標(biāo)mRNA的表達(dá)豐度的變化、用ELISA法觀察HBsAg表達(dá)的變化.各組指標(biāo)用t檢驗(yàn)方法進(jìn)行顯著性檢驗(yàn).結(jié)果:siRNA處理組細(xì)胞上清中
2、HBsAg、HBeAg含量分別比空白對(duì)照組降低63.4％和68.02％,差異有顯著性[P<0.01],細(xì)胞中的2.1kb的信使RNA含量比空白對(duì)照組降低75.2％,差異有顯著性[P<0.01=.結(jié)論:siRNA能有效的抑制轉(zhuǎn)染ayw亞型HBV全基因組表達(dá)質(zhì)粒-pCMV-HBV30體外培養(yǎng)的HepG2細(xì)胞中HBsAg、HBeAg蛋白的表達(dá),與對(duì)照組相比,細(xì)胞中2.1kb信使RNA的含量明顯降低,有效的抑制了HBV在體外培養(yǎng)的HepG2細(xì)胞
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