西瓜未受精胚珠離體培養(yǎng)研究.pdf

1、單倍體培養(yǎng)能快速純合基因型，獲得新的種質(zhì)資源，與常規(guī)育種方法相結(jié)合可以加速育種進程，拓寬育種途徑;所獲得的單倍體材料也可以用于基因定位和遺傳圖譜的構(gòu)建。一般通過誘導雌核發(fā)育和雄核發(fā)育獲得單倍體。國內(nèi)外許多研究者對西瓜單倍體的誘導進行了研究，和輻射花粉授粉、花藥離體培養(yǎng)和未受精子房離體培養(yǎng)相比，西瓜未受精胚珠離體培養(yǎng)的研究相對較少且未有成功的報道，而在葫蘆科作物中，南瓜、黃瓜、甜瓜、西葫蘆的離體誘導雌核發(fā)育都獲得了再生植株。因此，本研究以

2、西瓜未受精胚珠為外植體，探索通過未受精胚珠離體培養(yǎng)途徑獲得單倍體植株的可能性，明確培養(yǎng)過程中的影響因素，為高效穩(wěn)定的西瓜未受精胚珠離體培養(yǎng)體系建立提供技術(shù)支持。本試驗的主要研究結(jié)果如下:
　　1.愈傷組織誘導影響因素的研究:(1)基因型:基因型是影響誘導成功的關(guān)鍵因素，試驗中8個不同材料（基因型）的胚珠反應率和愈傷誘導率都有顯著性差異，愈傷誘導率最高的是中科6號(92.3％)，最低的是野生西瓜‘09005’(57.2％);(2)低

3、溫預處理:4℃低溫預處理沒有顯著提高胚珠反應率和愈傷誘導率，對于胚珠反應率和愈傷誘導率的影響因培養(yǎng)基不同而不同;(3)高溫預培養(yǎng):35℃高溫預培養(yǎng)可以提高胚珠反應率和愈傷誘導率，預培養(yǎng)3d可以得到較高的愈傷誘導率和質(zhì)量較好的愈傷組織;(4)培養(yǎng)基:本試驗采用正交設計對25種誘導培養(yǎng)基進行了篩選，6-BA和NAA對啟動胚珠發(fā)育和愈傷組織生長有重要影響;2，4-D誘導出的愈傷組織難以分化;培養(yǎng)基中添加ABA不利于胚珠反應和產(chǎn)生愈傷組織。

4、r>　　2.再生植株誘導影響因素的研究:(1)基因型:本試驗采用大果黑美人、西農(nóng)8號和野生西瓜‘09005’誘導再生植株時，野生西瓜‘09005’沒有得到再生植株，其它兩個材料獲得了再生植株和芽叢;(2)取材時間:本試驗比較了開花當天和花后1天的未受精胚珠對再生植株誘導的影響，花后1天的材料利于再生植株的誘導;(3)培養(yǎng)基:較低的激素水平濃度組合6-BA1 mg/L+NAA0.5 mg/L+TDZ0.05 mg/L更利于通過胚狀體發(fā)育途

5、徑產(chǎn)生再生植株;培養(yǎng)基中添加水解酪蛋白有利于胚珠的發(fā)育，以600mg/L最為適宜。
　　3.通過誘導西瓜未受精胚珠獲得了大量的愈傷組織，對離體培養(yǎng)的未受精胚珠進行石蠟切片觀察愈傷組織來源，結(jié)果表明:珠被細胞極易產(chǎn)生愈傷組織，由珠被組織產(chǎn)生的愈傷難以分化成苗。
　　4.試驗獲得了3棵完整的再生植株，并對再生植株進行了SSR分子鑒定，證明得到的再生植株基因型是純合的。說明通過離體培養(yǎng)未受精胚珠獲得再生植株是可行的，本試驗研究結(jié)果