小麥品質(zhì)性狀相關(guān)基因的分離及種子淀粉品質(zhì)的遺傳改良.pdf

1、 小麥?zhǔn)鞘澜缧缘闹匾Z食作物，在我國是僅次于水稻的第二大糧食作物，其產(chǎn)量與品質(zhì)直接關(guān)系人類食物的供應(yīng)程度和營養(yǎng)水平。 本文以授粉后12天的小麥種子為材料，構(gòu)建cDNA文庫。從中隨機(jī)挑選10,000個(gè)克隆，利用Biomek 2000核酸工作站制成高密度cDNA陣列。然后分別以未受精子房、胚和胚乳中提取的RNA為模板，反轉(zhuǎn)錄合成探針與膜雜交，進(jìn)行差異篩選。根據(jù)篩選結(jié)果，選取800個(gè)在胚、胚乳或胚和胚乳中表達(dá)的克隆進(jìn)行表達(dá)序列標(biāo)

2、簽(EST)分析，鑒定出216個(gè)不同的基因序列。其中與小麥品質(zhì)性狀相關(guān)的基因有54個(gè)，這些基因?qū)槠焚|(zhì)改良提供重要的基礎(chǔ)資料。進(jìn)而，為獲取低直鏈淀粉的轉(zhuǎn)基因小麥材料，通過上述cDNAmicroarray雜交技術(shù)篩選出一個(gè)克隆GBSSI；然后構(gòu)建RNAi表達(dá)載體，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法轉(zhuǎn)化小麥，通過PCR，RT-PCR和葉片離體褪綠實(shí)驗(yàn)鑒定出4株轉(zhuǎn)基因植株。對淀粉進(jìn)行的碘試劑染色實(shí)驗(yàn)和淀粉含量的測定結(jié)果表明GBSSI基因的RNA沉默使轉(zhuǎn)基因