多耐藥鮑曼不動桿菌生物膜形成與氨溴索干預(yù)效果研究.pdf

1、目的:探討臨床下呼吸道分離的多重耐藥鮑曼不動桿菌生物膜形成能力;定植與感染狀態(tài)的多耐藥鮑曼不動桿菌生物膜形成能力及兩種生物膜相關(guān)基因（abaI和blaPER-1）表達(dá)的差異;氨溴索對鮑曼不動桿菌生物膜形成的干預(yù)效果。
　　方法:
　　1.菌株來源:2011.11-2012.2年自河北省4家醫(yī)院患者下呼吸道檢出的45株多重耐藥鮑曼不動桿菌菌株，依據(jù)CPIS評分及細(xì)菌定量培養(yǎng)結(jié)果將其分為感染組與定植組，其中感染組32株，定植組1

2、3株。
　　2.通過24孔板體外培養(yǎng)細(xì)菌，結(jié)晶紫染色后，測定570nm吸光度值來定量反應(yīng)生物膜形成的多少，并分析生物膜形成能力在定植與感染組間是否有差異。A570為空白對照組兩倍以上為生物膜形成陽性。
　　3.通過向培養(yǎng)基中加入不同濃度的氨溴索，來觀察氨溴索是否對鮑曼不動桿菌的生物膜具有抑制作用，并通過電鏡來觀察生物膜形態(tài)的變化。
　　4.通過PCR方法來研究abaI和blaPER-1基因的表達(dá)情況，以及定植組與感染組

3、間表達(dá)是否存在差異。依據(jù)參考文獻(xiàn)[2][3]合成abaI及blaPER-1基因上游及下游引物，通過PCR儀對目的基因進(jìn)行擴增。
　　abaI基因: F:5'CCGCCATGAATATTATT-3'R:5'-GCCTTACACATCAATCAAGCATGC-3'
　　blaPER-1基因: F:5'-ATGAATGTCATTATAAAAGC-3'R:5'-AATTTGGGCTTAGGG CAGAA-3'
　　5.PCR產(chǎn)

4、物分析:將擴增產(chǎn)物置于1％瓊脂糖凝膠中進(jìn)行電泳，通過成像儀攝像并保存結(jié)果。
　　結(jié)果:
　　1.生物膜形成能力:所有菌株中共有34株形成生物膜，生物膜形成率為75.6％;定植組中共有10株形成生物膜，生物膜形成率為76.9％;感染組中共有24株形成生物膜，生物膜形成陽性率為75％。通過卡方檢驗分析其構(gòu)成比，p=1.000，表明定植與感染組間生物膜形成率無統(tǒng)計學(xué)差異。定植組570nm平均吸光度為0.54±0.32，感染組570

5、nm平均吸光度為0.51±0.27，通過t檢驗，p=0.765，表明定植組與感染組生物膜形成量亦無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　2.對照組、2mg/ml氨溴索組、4mg/ml氨溴索組570nm平均吸光度為:0.52±0.28、0.30±0.16、0.19±0.09，通過ANOVA分析，p=0.000，三組間存在統(tǒng)計學(xué)差異;并通過S-N-K法分析，任意兩組間均存在統(tǒng)計學(xué)差異，表明氨溴索對生物膜的形成具有抑制作用，其抑制作用存在劑量依賴關(guān)系，濃度

6、越大抑制作用越強。通過掃描電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，加入氨溴索后使生物膜的厚度及細(xì)菌數(shù)量均減少，與半定量結(jié)果一致。
　　3.所有菌株abaI基因表達(dá)陽性率為91.1％(41/45);其中定植組abaI基因表達(dá)陽性率為92.3％(12/13)，感染組abaI基因表達(dá)陽性率為為90.6％(29/32);通過卡方檢驗分析其構(gòu)成比，p=1.000，表明定植組與感染組間abaI基因表達(dá)率無統(tǒng)計學(xué)差異。所有菌株中共有18株blaPER-1基因表達(dá)陽性，陽

7、性率為40％(18/45);其中定植組blaPER-1基因陽性率為46.2％(6/13)，感染組blaPER-1基因陽性率為37.5％(12/32);通過卡方檢驗分析其構(gòu)成比，p=0.591，表明定植與感染組間blaPER-1基因表達(dá)率無統(tǒng)計學(xué)差異。blaPER-1基因陽性菌中14株形成生物膜(14/18)，blaPER-1基因陰性菌中有20株形成生物膜(20/27)，通過卡方檢驗分析其構(gòu)成比，p=1.000，兩者不具有統(tǒng)計學(xué)差異。bl

8、aPER-1基因陽性菌570nm處平均吸光度為0.60±0.35，blaPER-1基因陽性菌570nm處平均吸光度為0.46±0.21，通過t檢驗，p=0.025，兩者具有統(tǒng)計學(xué)差異，表明blaPER-1基因陽性菌的生物膜形成量大于陰性菌。
　　結(jié)論:
　　1.下呼吸道檢出的多重耐藥鮑曼不動桿菌具有較強的生物膜形成能力，生物膜形成能力在感染組和定植組間無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　2.氨溴索對鮑曼不動桿菌生物膜的形成具有抑制作用