水通道蛋白8在鼻息肉中的表達(dá)及意義的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景及研究目的： 鼻息肉(nasalpolyp)是一種常見(jiàn)鼻病，是一種鼻腔、鼻竇的慢性炎癥性疾病，形態(tài)學(xué)改變包括上皮增殖、肥厚、腺體增生、血管生成、細(xì)胞外基質(zhì)堆積及局部纖維化，其病因和發(fā)病機(jī)制尚不明確，趨于多因素病因?qū)W說(shuō)和鼻通氣與鼻氣道阻力(nasalairwayresistance，NAR)學(xué)說(shuō)，認(rèn)為鼻息肉的形成是多種因素共同作用的結(jié)果。水通道蛋白即水孔蛋白是選擇性水通透的內(nèi)在膜蛋白。Wellner等發(fā)現(xiàn)AQP-8后證實(shí)：大多

2、數(shù)水通道以固有活性狀態(tài)存在于所分布的組織，一般不需要“門(mén)控"或其他調(diào)節(jié)，從而使水代謝研究躍入了一個(gè)新的階段。已知鼻息肉是一個(gè)高度水腫的組織，組織液被稀釋，離子濃度降低，導(dǎo)致細(xì)胞外液滲透壓減低，水即通過(guò)水通道由組織液流向細(xì)胞內(nèi)，而細(xì)胞內(nèi)的各種分子和離子自然就會(huì)沿著濃度的梯度向細(xì)胞外彌散，因而導(dǎo)致組織水腫。本研究采用免疫組織化學(xué)技術(shù)，RT-PCR及HE染色分別觀察鼻息肉組織中細(xì)胞學(xué)特點(diǎn)，AQP8在鼻息肉組織及正常下鼻甲粘膜中的表達(dá)及分布，觀

3、察AQPS在鼻息肉組織和正常下鼻甲中表達(dá)的相關(guān)性，探討AQP8在鼻息肉的形成中的作用。 方法： 將實(shí)驗(yàn)材料分為兩組：鼻息肉標(biāo)本和正常下鼻甲粘膜，行HE染色和免疫組織化學(xué)檢測(cè)40例鼻息肉、20例正常下鼻甲AQP8的定位表達(dá)和鼻息肉組織中病理學(xué)特點(diǎn)。同時(shí)用TRIZOL進(jìn)行mRNA提取，采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法檢測(cè)20例鼻息肉組織和18例正常下鼻甲組織中AQP8的mRNA的表達(dá)，并用凝膠圖象分析系統(tǒng)進(jìn)行圖象分

4、析鼻息肉和正常下鼻甲組織AQP8表達(dá)量的變化。 結(jié)果： 一、AQP8在鼻息肉和正常下鼻甲組織中的免疫組織化學(xué)結(jié)果(一)、AQP8的定位表達(dá)情況 AQP8為1：100的一抗?jié)舛葧r(shí)可以發(fā)現(xiàn)其在鼻息肉和下鼻甲組織中不同部位有穩(wěn)定、清晰的染色反應(yīng)：AQP8在正常下鼻甲組織的上皮纖毛細(xì)胞，肌上皮細(xì)胞，固有層腺體，血管均表達(dá)，但主要是表達(dá)于腺體，血管表達(dá)較少。AQP8在鼻息肉組織的上皮及固有層都有表達(dá)，但主要表達(dá)于固有層漿液

5、性腺細(xì)胞，同時(shí)固有層毛細(xì)血管及血竇內(nèi)皮細(xì)胞亦有強(qiáng)表達(dá)，而導(dǎo)管及上皮細(xì)胞表達(dá)減少。 (二)AQP8在鼻息肉和正常下鼻甲組織免疫組織化學(xué)高倍視野下手工計(jì)數(shù)各層結(jié)構(gòu)的陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)數(shù)的變化 陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)數(shù)結(jié)果表明：鼻息肉和下鼻甲上皮細(xì)胞層AQP8的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0．05)；下鼻甲比鼻息肉固有腺體AQP8表達(dá)顯著減少，鼻息肉血管及血竇內(nèi)皮細(xì)胞AQP8表達(dá)比下鼻甲顯著增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)。 二、

6、RT-PCR分析結(jié)果 經(jīng)RT-PCR擴(kuò)增后，產(chǎn)物為398bp的片段，20例鼻息肉組織中測(cè)出AQP8mRNA的表達(dá)OD值與自身內(nèi)參比值為0．95士0．03，而正常下鼻甲中僅有0．48士0．01(P<0．05)。 結(jié)論： (1)AQP8在鼻息肉中的表達(dá)較正常下鼻甲黏膜明顯上調(diào)，充分考慮水通道蛋白對(duì)鼻息肉產(chǎn)生過(guò)程中水代謝的影響； (2)AQP8在正常下鼻甲組織的上皮纖毛細(xì)胞，肌上皮細(xì)胞，固有層腺體，血管均表達(dá)，