坎地沙坦對(duì)小鼠移植性肝癌生長(zhǎng)及新生血管的抑制作用.pdf

1、目的:早在1971年Folkman就提出了腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移依賴于血管生成的觀點(diǎn)。臨床和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí),如果沒(méi)有新血管生成,腫瘤直徑或厚度達(dá)1～2mm后就停止增長(zhǎng)。研究發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞既可產(chǎn)生血管生長(zhǎng)因子,同時(shí)又可誘導(dǎo)多種抗血管生成因子生成;當(dāng)腫瘤血管生長(zhǎng)因子作用大于抗血管生成因子作用時(shí),腫瘤生長(zhǎng)加速,導(dǎo)致腫瘤轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)。抑制腫瘤血管生成即可阻止腫瘤的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移、或復(fù)發(fā)。目前,多種抗腫瘤血管生成藥物已應(yīng)用于臨床,并使各種惡性腫瘤患者受益。血管緊張

2、素Ⅱ(AngⅡ)是腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS)中的一種生物活性肽,在調(diào)節(jié)心血管功能和水電解質(zhì)平衡方面起著重要作用;臨床與動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究表明:AngⅡ具有促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、腫瘤血管形成的作用。研究血管緊張素Ⅱ1型受體(AT1R)拮抗劑坎地沙坦對(duì)腫瘤新生血管的抑制作用,有利于探討腫瘤生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)機(jī)制,有利于探討晚期惡性腫瘤的治療,有利于腫瘤血管靶向藥物的研發(fā)。
　　 方法:隨機(jī)將50只BALB/C雄性小鼠分為5組:生理鹽水組(N

3、EC,空白對(duì)照組,常溫0.9％NS0.6ml/只)、低劑量坎地沙坦組(LCA,50mg/day/kg)、中劑量坎地沙坦組(MCA,100mg/day/kg)、高劑量坎地沙坦組(HCA,200mg/day/kg)和氟尿嘧啶組(2.5％5-FU,25mg/day/kg)。建立肝癌實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型,建模成功后,分別對(duì)5組小鼠實(shí)施干預(yù);NEC空白對(duì)照組每日上午10時(shí)左右應(yīng)用0.6ml/只常溫0.9％NS灌胃,每日一次,連續(xù)8天;LCA、MCA、HC

4、A實(shí)驗(yàn)組每日上午10時(shí)左右應(yīng)用50mg/day/kg、100mg/day/kg、200mg/day/kg常溫坎地沙坦溶液灌胃,每日一次,連續(xù)8天;5-FU組每日上午10時(shí)左右應(yīng)用常溫2.5％5-FU溶液腹腔注射,連續(xù)6天。實(shí)驗(yàn)前、實(shí)驗(yàn)后第2、4、6、8日給藥前測(cè)量小鼠體重,于實(shí)驗(yàn)后第9日,將各組小鼠全部脫頸處死,手術(shù)完整撥取腫瘤組織并稱重,將撥取組織等分切開(kāi),分別10％福爾馬林固定(以備HE染色和免疫組化,觀察腫瘤組織AT1陽(yáng)性率和MV

5、D),4％戊二醛固定(以備透射電鏡研究)。
　　 結(jié)果:1.NEC空白對(duì)照組小鼠體重逐日增加,實(shí)驗(yàn)后第8日小鼠平均體重為20.85±1.34g。其余各組小鼠體重逐日不同程度下降,實(shí)驗(yàn)后第8日各組小鼠平均體重分別為:17.13±2.89g(HCA)、18.53±2.01g(MCA)、19.44±1.60g(LCA)、15.75±2.63g(5-FU)。方差分析結(jié)果表明:各組間差異顯著(P＜0.05);提示:隨著坎地沙坦劑量增加,小

6、鼠的體重逐漸下降。2.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后應(yīng)用計(jì)數(shù)資料統(tǒng)計(jì)方法檢驗(yàn)各組間小鼠生存質(zhì)量評(píng)分,結(jié)果表明:各組間小鼠的生存質(zhì)量存在顯著差異(P＜0.05);提示:隨著坎地沙坦劑量增加,小鼠的生存質(zhì)量不斷提高。3.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后各組小鼠腫瘤體積分別為233.66±1.62mm3(NEC)、144.74±1.21mm3(HCA)、149.18±88.72mm3(MCA)、238.63±1.42mm3(LCA)與69.05±41.87mm3(5-FU),方差分析

7、結(jié)果表明:各組間差異顯著(P＜0.05);提示:隨著坎地沙坦劑量增加,小鼠的腫瘤體積逐漸下降。4.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后各組間小鼠腫瘤重量分別為0.9462±0.12g(NEC)、0.5193±0.12g(HCA)、0.6009±0.15g(MCA)、0.8450±0.18g(LCA)、0.5347±0.05g(5-FU),方差分析結(jié)果表明:各組間差異顯著(P＜0.05);提示:隨著坎地沙坦劑量增加,小鼠的腫瘤重量逐漸下降。5.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后各組小鼠腫

8、瘤內(nèi)平均微血管密度(MVD)分別為11.70±2.63(NEC)、4.80±0.92(HCA)、7.30±1.06(MCA)、7.60±0.84(LCA)、10.90±1.37(5-FU),方差分析結(jié)果表明:各組間差異顯著(P＜0.01);提示:(1)隨著坎地沙坦劑量增加,小鼠腫瘤內(nèi)MVD逐漸下降;(2)坎地沙坦可通過(guò)抑制腫瘤血管生成,遏制腫瘤增長(zhǎng),與5-FIU的作用機(jī)制不同。6.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后應(yīng)用計(jì)數(shù)資料統(tǒng)計(jì)方法檢驗(yàn)各組間小鼠腫瘤AT1R

9、的表達(dá)程度,結(jié)果表明:各組間差異顯著(P＜0.05)。提示:坎地沙坦抗腫瘤作用是通過(guò)AT1R來(lái)實(shí)現(xiàn)。7.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后透射電鏡研究各組小鼠的腫瘤細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu),結(jié)果表明:各組均見(jiàn)腫瘤細(xì)胞不同程度崩解與壞死、細(xì)胞膜不完整。
　　 結(jié)論:AT1R拮抗劑(坎地沙坦)可顯著地抑制小鼠移植性肝癌的生長(zhǎng)、抑制肝癌血管生成、降低AT1R的表達(dá)、提高小鼠的生活質(zhì)量;坎地沙坦作用可能是通過(guò)AT1R來(lái)實(shí)現(xiàn)。本研究結(jié)果再次證實(shí):坎地沙坦可作為新的抗腫瘤血