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文檔簡介
1、本研究旨在應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù),對編碼ApxⅠ和ApxⅢ N-端的apxⅠA和apxⅢA部分基因片段在原核表達系統(tǒng)中進行表達,為建立豬傳染性胸膜肺炎的新型診斷方法和高效亞單位疫苗的研制奠定了基礎(chǔ).結(jié)果重組質(zhì)粒pMD-apxⅠA和pMD-apxⅢA經(jīng)鑒定證明克隆成功,所測apxⅠA全基因的核苷酸序列與Genbank數(shù)據(jù)庫中公布的同源參考序列(編號AF363361、D16582)的同源性為93﹪~99.2﹪;apxⅢA全基因的核苷酸序列與Ge
2、nBank上血清2型(EWSDSL 12145)的同源性為95﹪,與血清8型(X68815)的同源性達90.8﹪.編碼ApxⅠ和ApxⅢ的N-端的apxⅠA和apxⅢA基因片段(1149bp和1194bp)成功插入表達載體pET-28a(+),構(gòu)建了重組表達載體pET-apxⅠA和pET-apxⅢA.SDS-PAGE電泳、Western-blotting分析結(jié)果表明apxⅠA和apxⅢA基因在人腸桿菌中能高效表達,表達量占菌體蛋白總量的
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