主動(dòng)外排系統(tǒng)介導(dǎo)的鮑曼不動(dòng)桿菌多重耐藥機(jī)制研究.pdf

1、[研究背景]鮑曼不動(dòng)桿菌已成為引起嚴(yán)重致死性院內(nèi)感染重要病原菌，常表現(xiàn)為對(duì)多種抗菌藥物耐藥即多重耐藥，易引起醫(yī)院獲得性肺炎、菌血癥、泌尿系統(tǒng)感染、腦膜炎、軟組織感染以及腹腔內(nèi)感染等嚴(yán)重感染。特別是近年國(guó)內(nèi)外報(bào)道耐碳青霉烯類多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌，在重癥監(jiān)護(hù)病房、血液病房引起爆發(fā)流行，病死率高。鮑曼不動(dòng)桿菌感染治療越來(lái)越困難，臨床治療面臨著嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)。因此加強(qiáng)對(duì)其耐藥性監(jiān)測(cè)，研究其耐藥分子機(jī)制，對(duì)于控制和治療鮑曼不動(dòng)桿菌引起的醫(yī)院內(nèi)感染具有

2、重要的現(xiàn)實(shí)意義。 [目的]篩選分離鮑曼不動(dòng)桿菌臨床菌中多重耐藥菌株，測(cè)定其耐藥表型及耐藥模式；以氟喹諾酮類和氨基糖苷類為代表測(cè)定外排泵抑制劑對(duì)抗菌藥物對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌抗菌活性的影響；研究臨床分離鮑曼不動(dòng)桿菌中外排泵基因表達(dá)情況；測(cè)定鮑曼不動(dòng)桿菌外膜蛋白，分析其與鮑曼不動(dòng)桿菌多重耐藥性的關(guān)系。 [方法] (1)采用瓊脂二倍稀釋法檢測(cè)24種抗菌藥物對(duì)87株鮑曼不動(dòng)桿菌的耐藥表型；用RAPD分型方法分析多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿

3、菌的基因同源性。 (2)瓊脂二倍稀釋法測(cè)定外排泵抑制劑(利血平和CCCP)對(duì)氟喹諾酮類和氨基糖苷類抗菌藥物對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌的抗菌活性的影響；初步探討鮑曼不動(dòng)桿菌臨床分離株中外排泵的分布情況。 (3)設(shè)計(jì)外排蛋白(AdeABC)基因特異性引，PCR擴(kuò)增多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌各克隆中外排蛋白基因，通過(guò)DNA測(cè)序及在GeneBank上進(jìn)行序列比對(duì)分析測(cè)序結(jié)果，了解外排泵蛋白基因結(jié)構(gòu)；分析外排蛋白表達(dá)陽(yáng)性菌株在耐藥表型方面的差異。

4、 (4)提取多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌外膜蛋白，進(jìn)行SDS-PAGE分析，研究其與多重耐藥性的關(guān)系。 [結(jié)論] (1)北京地區(qū)醫(yī)院中多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)碳青霉烯類敏感性明顯下降，對(duì)其他藥物尤其是第三、四代頭孢菌素類及β-內(nèi)酰胺酶抑制劑復(fù)合制劑敏感性也顯著降低，同時(shí)對(duì)磺胺類、氨基糖苷類耐藥率較高。 (2)本研究發(fā)現(xiàn)外排泵抑制劑利血平和CCCP均可增強(qiáng)氟喹諾酮類藥物的抗菌活性，尤以左氧氟沙星和加替沙星表現(xiàn)明顯，而對(duì)

5、氨基糖苷類藥物的影響并不很明顯。提示本研究所收集的多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)氟喹諾酮類的耐藥與主動(dòng)外排密切相關(guān)。 (3)RAPD結(jié)果顯示，68株多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌菌株中分6個(gè)克隆株，提示多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌菌株來(lái)源有很大差異，是由多個(gè)獨(dú)立來(lái)源發(fā)展而來(lái)的，可能與抗菌藥物選擇壓力相關(guān)。 (4)外排蛋白基因在多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌中表達(dá)陽(yáng)性，其結(jié)構(gòu)與Genebank同源性達(dá)99％。 (5)多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌中外膜蛋白缺失