利用電融合方法生產(chǎn)體細(xì)胞克隆小鼠.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)主要研究電融合技術(shù)對于體細(xì)胞克隆小鼠生產(chǎn)的可行性和影響因素。采用新鮮的顆粒細(xì)胞直接注入到去除遺傳物質(zhì)的MⅡ期卵母細(xì)胞的透明帶下，在1次2.4kv/cm，20usec的直流電脈沖作用下，采用沒有Ca2+融合液(0.3mol/L甘露醇)誘導(dǎo)細(xì)胞融合。融合后的胚胎經(jīng)過1小時(shí)的培養(yǎng)，放置在含有10mmol/L Sr2+的激活液中活化6小時(shí)?；罨蟮呐咛?，一部分在體外培養(yǎng)3.5天，觀察囊胚發(fā)育率，并且移植到假孕2.5天的代孕母鼠子宮中；另外

2、一部分在體外培養(yǎng)到2-細(xì)胞期，移植到假孕0.5天的代孕母鼠輸卵管壺腹部中。19.5天后，通過剖腹產(chǎn)獲得體細(xì)胞克隆小鼠。對照實(shí)驗(yàn)采用注射的方法同樣獲得體細(xì)胞克隆小鼠。通過對電融合和注射方法獲得的克隆胚胎對比，發(fā)現(xiàn)2種克隆胚胎在活化率上沒有顯著差異(87.3％VS 90.3％，P＞0.05)。但是在卵裂率(82.4％VS 92.9％，P＜0.05)和囊胚率(47.3％VS 57.2％，P＜0.05)上，具有顯著差異。實(shí)驗(yàn)還對影響融合效率的一