斜帶石斑魚Sox11b cDNA的克隆、表達(dá)及功能分析.pdf

1、本文利用PCR篩庫(kù)法結(jié)合5’RACE法和3’RACE法，成功地從4齡斜帶石斑魚的卵巢cDNA文庫(kù)中篩選出一種SRY相似基因，全長(zhǎng)為2253bp，編碼一個(gè)389個(gè)氨基酸的多肽，命名為Sox11b。氨基酸序列分析表明它的HMG區(qū)域同其它Sox11蛋白的HMG區(qū)域相差1～2個(gè)氨基酸，屬于Sox蛋白家族的C亞族成員中的Sox11蛋白；進(jìn)化樹分析完整蛋白表明，它與所有魚類Sox11蛋白處于同一簇，與斑馬魚Sox11b蛋白以及虹鱒魚Sox24蛋白處

2、于同一分支。Sox11b為單拷貝基因。該基因在卵巢的mRNA全長(zhǎng)為2.3kb。　　一步法RT-PCR結(jié)合Southern雜交表明：Sox11b除了血液未檢測(cè)到表達(dá)外，其它所有組織都有廣泛表達(dá)；在卵巢有非常高的表達(dá)量；在嗅球、前腦、后腦、下丘腦、延腦、垂體、鰓、心臟、肝臟、肌肉能檢測(cè)到表達(dá)；在中腦、腎臟、脾臟、脂肪能檢測(cè)到低的表達(dá)量；在胚胎和仔魚發(fā)育過程中，一直都有表達(dá)，且在受精卵和胚胎發(fā)育早期有較高的表達(dá)量，但在晶體期、孵化后5天、1

3、8天、33天都有出現(xiàn)表達(dá)量降低的現(xiàn)象。Northern雜交表明：在脂肪未檢測(cè)到表達(dá)；在全腦組織、脾臟可見非常低的表達(dá)；在4齡魚卵巢、2齡魚卵巢都能檢測(cè)到非常高的表達(dá)量，且4齡魚卵巢Sox11bmRNA的表達(dá)量高于2齡魚卵巢。對(duì)自然性逆轉(zhuǎn)過程的魚的性腺，進(jìn)行Northern雜交和RT-PCR分析都表明，卵巢發(fā)育越好的魚，Sox11bmRNA的表達(dá)量越高，隨著性轉(zhuǎn)變?yōu)榫?，Sox11bmRNA表達(dá)量降低。對(duì)MT人工誘導(dǎo)性逆轉(zhuǎn)魚的性腺，進(jìn)行R