四川桂花品種的RAPD分析.pdf

1、研究利用隨機(jī)多態(tài)性DNA(RAPD)技術(shù)對四川桂花(Osmanthusfragrans(Thunb.)Lour.)進(jìn)行品種分類分析，所選用的80個樣品分別來自四個桂花品種群：銀桂品種群(Latifoliusgroup)、金桂品種群(Thunbergiigroup)、丹桂品種群(Autiacusgroup)和四季桂品種群(Fragransgroup)。試驗進(jìn)行了擴(kuò)增反應(yīng)程序和反應(yīng)體系的優(yōu)化篩選；初選出了20條可用于桂花RAPD分析的引物，

2、并進(jìn)行了二次篩選，選出9條引物進(jìn)行聚類分析，建立了UMPGA聚類分析圖。本試驗得到以下結(jié)論：1得到了用于桂花DNA提取得最佳方法：調(diào)整的CTAB法。2篩選出了擴(kuò)增反應(yīng)程序：94℃，3min啟動，94℃，50s→36℃，1min→72℃，1.5min，38個循環(huán)→72℃，10min終止。3篩選出了反應(yīng)體系：25μl體系，包括DNA40ng，引物10pmol，dNTPs0.15mmolL-1，10×Buffer2.5μl,2.5mmol·L

3、-1MgCl2，TaqDNA聚合酶1U。4篩選出可以用于桂花RAPD分析的20條引物，并進(jìn)行二次篩選，得到9條多態(tài)性和特異性好的引物用于四川桂花品種的RAPD分析。59條引物對80個四川桂花樣品進(jìn)行RAPD擴(kuò)增，共記錄47條帶，長度處于0.2～2kb之間，其中45條條帶具有多態(tài)性，多態(tài)性高達(dá)95.7％。平均每條引物擴(kuò)增出9條帶，最多的有7條，最少的也有四條。建立了遺傳距離矩陣圖，并建立了遺傳關(guān)系樹狀圖。6對80個桂花樣品進(jìn)行遺傳關(guān)系比較