小麥耐鹽相關基因的克隆與分析.pdf

1、河北師范大學碩士學位論文小麥耐鹽相關基因的克隆與分析姓名：黃勝和申請學位級別：碩士專業(yè)：遺傳學指導教師：黃占景沈銀柱20050501河北帥范大學碩十研究生學位論文摘要植物耐鹽性研究不僅對作物遺傳改良有重要意義，而且還是植物基礎生物學研究的一個重要組成部分。因此，植物耐鹽相關基岡的克隆受到人們廣泛的關注。近年來，隨著分子生物學的迅速發(fā)展，科學家們發(fā)現(xiàn)并克隆了一些植物耐鹽相關基因，但離人們的期望值還相籌很遠。本研究在本室用cDNA—AFLP

2、得到G09～94號差異eDNA序列的基礎上，通過EST比對進行電子克隆，得到一含完整ORF區(qū)的eDNA序列，再以此cDNA序列進行Blastn，發(fā)現(xiàn)與水稻一未知功能的基因同源性達90％。設計引物，進行PCR，測序結果與電子克隆結果完全一致，證明克隆成功。Northern雜交顯示，0％Natl處理的H8706—34和RH8706—49幼苗、l％Nacl處理的H8706—34和RH8706—49幼曲都表達此基因，但1％NaCl處理的RH87

3、06—49表達量明顯增高因此，將此基岡命名為7aSC(Triticumasetivu$LSa]ttolerantCorrelative)，井作為一新基因被GemBank接受(AY956330)。表達譜基因芯片數(shù)據(jù)庫顯示，用l％NaCl處理RH8706—49小麥幼苗，此基因在葉片中為短時間表達F調，比時間表達上調。半定最RT—PCR結果證實，用1％NaC]處理，H870634根部TaSC基因表達量先F降，然后緩慢上升到正常量，而RH870

4、6—49中短時間表達下調，長時間表達上凋。比對EST庫結果表明，7aSC基因在根、N卜種_F、幼穗、子房等組織器官中都有表達，而比對MappedwheatESTs庫結果可以將TaSC基因定位于染色體5BL、5DL、7DS上。將DNA序列翻譯成蛋白，用多個生物軟件或專業(yè)網站預測其性質、結構、定位和功能，結果顯示，此蛋白pI值為396，分子量為1531576Da，有4個跨膜區(qū)和1個信號肽區(qū)，定位在質膜上，與一未知功能的假定膜蛋白同源性為82

5、2％，與另一未知功能的蛋自家族(UFP220)同源性達798％，并且具有豆蔻酰化、酪氨酸硫酸化、酪蛋白激酶II磷酸化和蛋白激酶C磷酸化等功能位點。因此推測玩孵基因是組成型表達，而且沒有組織器官特異性，同時，可能是植物逆境脅迫反應網絡中的一個中下游基因，其表達產物參與了多條信號轉導途徑，將上游反應信號轉導到下游反應元件。以克隆載體為基礎，構建了雙元表達載體p1300一TS和p1300一TS—GP，并與對照質粒p1300、p1300一GP一