斜帶石斑魚腦腸肽及其受體的克隆與mrna表達(dá)研究

1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文斜帶石斑魚腦腸肽及其受體的克隆與mRNA表達(dá)研究答辯委員會(huì)主席：委員：作者：陳廷專業(yè)：水生生物學(xué)導(dǎo)師：李文笙教授中山大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院水生經(jīng)濟(jì)動(dòng)物研究所中國(guó)廣州，5102752007年5月斜帶石斑魚腦腸肽及其受體的克隆與mRNA表達(dá)研究體蛋白，包括26氨基酸的信號(hào)肽，20氨基酸的成熟肽和56氨基酸的C末端多肽，除了成熟肽功能位點(diǎn)上的6個(gè)氨基酸(GxSFLSP)外，魚類各物種preproghrelin的氨基酸序列顯示高度

2、差異。斜帶石斑魚ghrelin基因包含四個(gè)外顯子和三個(gè)內(nèi)含子，其中第一個(gè)外顯子和二個(gè)外顯子編碼了ghrelln成熟肽，與羅非魚以及黑鯛中研究相類似，而其他魚類和哺乳類則在5’非編碼區(qū)多出一個(gè)外顯予。根據(jù)GHSR1a和ghrelin構(gòu)建的進(jìn)化樹，均表明斜帶石斑魚在進(jìn)化地位上與羅非魚及黑鯛位于同一支，而哺乳類則位于另一端。本文利用Northernblot和半定量RTPCR檢測(cè)了ghrelin和兩種形式GHSRmRNA的表達(dá)情況。Northe

3、rnblot和RTPCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，ghrefinmRNA只在胃中有表達(dá)，并且只有一個(gè)轉(zhuǎn)錄本。半定量RTPCR的分析表明，gpGHSRlamRNA主要在各腦區(qū)中表達(dá)，以下丘腦和垂體最高；而gpGHSR1bmRNA則廣泛分布于腦區(qū)和各外周組織中。兩種GHSR轉(zhuǎn)錄本與ghrelinmRNA的組織分布情況顯示，gpGHSR1a可能介導(dǎo)著ghrdin促生長(zhǎng)和促攝食方面的生物學(xué)功能，而gpGHSRlb則與ghrelin的作用無(wú)關(guān)。ghrelinmR

4、NA在下丘腦中沒(méi)有表達(dá)的情況，只在另外兩種鱸型且魚類羅非魚和黑鯛中報(bào)道，可能與它們?nèi)鄙僖粋€(gè)外顯子的特殊基因結(jié)構(gòu)有關(guān)。在胚胎發(fā)育階段，gpGHSRlamRNA從神經(jīng)胚期開(kāi)始表達(dá)，并在出膜3天后逐步升高，gpGHSRolbmRNA則從囊泡期開(kāi)始一直以穩(wěn)定水平表達(dá)，而ghrelin在出膜后3天開(kāi)始表達(dá)。胚胎發(fā)育階段mRNA的表達(dá)情況同樣表明ghrelin與gpGHSRla有功能上的相關(guān)。另外，利用原位雜交方法對(duì)斜帶石斑魚腦部的gpGHSRmR