H9N2亞型AIV基因組序列分析及用反向遺傳技術(shù)產(chǎn)生多個H9N2和H5重組流感病毒.pdf

1、揚州大學(xué)博士學(xué)位論文H9N2亞型AIV基因組序列分析及用反向遺傳技術(shù)產(chǎn)生多個H9N2和H5重組流感病毒姓名：盧建紅申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：劉秀梵20040501II揚州大學(xué)博士學(xué)位論文的RNA聚合酶A(PA)；片段4(HA基因)1742nt，編碼560aa的血凝素(HA)；片段5(NP基因)1565nt，編碼498aa的核蛋白(NP)；片段6(NA基因)1458nt，編碼466aa的神經(jīng)氨酸酶(NA)：片段7(M基因

2、)1027nt，編碼252aa的基質(zhì)蛋白(M1)和97aa的離子通道(M2)；片段8(NS基因)890nt，編碼217aa的非結(jié)構(gòu)蛋白(NSl)和121aa的出核轉(zhuǎn)運蛋白(NEP／NS2)。8個基因的序列己發(fā)表在GenBank，登錄號為AY250750一AY250756，AF461532。C／SH／F／98成為在GenBank中第一個登錄序列完整的H9N2貶型流感病毒株，也是中國大陸第一個自主登錄基因組全長序列的H9N2亞型毒株。從Ge

3、nBank中獲取1174個發(fā)表序列長短不一的H9N2亞型毒株的基因序列，與C／Sl／王啊8的8個相應(yīng)基因進行核苷酸和氨基酸序列比較，基因組序列及遺傳進化分析結(jié)果如下：C／SH／F／98完全不同于Q／HK／G1／97，與香港流感事件沒有直接關(guān)系，HA、NSl、PBl等蛋白保持普通tt9N2亞型毒株的特性。C／SH／F／98與Q／HK／G1／97比較，除M基因外的7個基因同源率均低，為855％一933％，具有型特異性的M基因同源率為96O％

4、。C／SH／F／98的8個基因均不在G11ike進化分支上。HA裂解位點序列為PARSSRlG，是低致病性H9N2流感病毒的模式，HA的226位受體結(jié)合位點(對應(yīng)H3亞型位置)的氨基酸為Gin，傾向于與動物細胞結(jié)合；NSl長度為217個氨基酸；pBl基因編碼區(qū)757位為賴氨酸(Lys)。而G1一like毒株HA為Leu226，傾向于與人類細胞結(jié)合：NSl長度為230個氨基酸；PBl多一個殘基(758個)，且C端倒數(shù)第二位為Gly757。

5、C／SH／F198的HA、NA、M、NS基因是BJ941ike成員，與C／Bei／i／94(BJ94)同源率分別為967％、964％、975％、98O％，其中，NA基因與D／HK／Y280／97的同源率為974％，而且它們的NA基因(eDNA)在205位后都缺失大多數(shù)毒株(包括BJ94)均具有的9個核苷酸。c／SH／F／98的RNP(PB2、PBl、PA和NP)基因不屬于1999年以前建立的已知三個穩(wěn)定亞系，分別在相應(yīng)的進化樹上另成分支

6、，推測中國大陸存在這4個基因的分支。因此，C／SH／F／98是兩個或兩個以上基因亞系間發(fā)生自然重排的產(chǎn)物。引人注意的是，廣東汕頭活禽市場分離株Duck／Shantou／1605／01與C／SII／F／98之間除NS基因以外的7個基因同源，雖然D／ST／1605／0l的HA和NA基因已發(fā)生變異，但HA仍保持雞源病毒的特點，而區(qū)別于早期的鴨源病毒株。因此，c／SH，F(xiàn)／98是D／ST／1605／01的前體，C／SH／F／98的基因一直在循環(huán)