兩種食用菌活性蛋白的分離純化及其抗病特性.pdf

1、福建農(nóng)林大學(xué)博士學(xué)位論文兩種食用菌活性蛋白的分離純化及其抗病特性姓名：吳麗萍申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：植物病理學(xué)指導(dǎo)教師：林奇英謝聯(lián)輝20040401福建農(nóng)林大學(xué)博士學(xué)位論文iI表明抗血清特異性高。以半葉法在枯斑寄主心葉煙上檢測(cè)YP4646蛋白對(duì)TMV的抑制率，發(fā)現(xiàn)有較好的抗TMV活性，其抑制TMV的中濃度C50為O240pgmL～aYP46—46蛋白對(duì)兔和人血凝集活性滴度為2一，其濃度分別為O219pgmL1。利用MGC80—3、SMM

2、C7721，及SPCAl檢測(cè)蛋白的體外抗腫瘤活性，其IC50約為20ug，mL～。YP46—46蛋白對(duì)供試的植物病原真菌和細(xì)菌均無(wú)抑制作用。對(duì)y3蛋白的抗nⅣ機(jī)制作了初步分析。結(jié)果表明y3蛋白對(duì)TMV不僅具有較強(qiáng)的體外鈍化作用，而且能抑制病毒在系統(tǒng)寄主煙草K326內(nèi)的復(fù)制。在心葉煙枯斑寄主上對(duì)TMV的侵染抑制中濃度約為20lagmL～；最適工作pH為90；TMV與y3蛋白混合后用RNase處理，測(cè)得侵染率為6174％，比未用RNase處

3、理的對(duì)照降低了3826％，說(shuō)明y3蛋白對(duì)TMV的外殼蛋白具有～定的破壞作用；蛋白銹抑制TMVCP在體外的聚合，還能阻止TMvCP與其抗體的結(jié)合；另外電鏡觀察發(fā)現(xiàn)y3可使部分TMV粒體發(fā)生裂解，變短。通過(guò)葉綠素含量檢測(cè)顯示蛋白能在一定程度上減緩植株感病后的癥狀。提取毛頭鬼傘中的總RNA，采用RACE方法和巢式PCR技術(shù)，根據(jù)y3蛋白N端20個(gè)氨基酸序列設(shè)計(jì)引物進(jìn)行了基因克隆。獲得了y3的部分eDNA序列以及3’端非編碼區(qū)。其序列長(zhǎng)度為41

4、4bp，其中ORF長(zhǎng)度包括終止密碼共291bp，編碼蛋白序列共96個(gè)氨基酸，3’非編碼區(qū)含有123個(gè)堿基，其中polyA為22個(gè)。經(jīng)NCBI中Blast比較沒(méi)找到同源序列。表明該基因?yàn)橐蝗滦蛄?GenBank接收號(hào)：602564)。加上N一端未用來(lái)設(shè)計(jì)引物的5個(gè)堿基，全長(zhǎng)共101個(gè)氨基酸。等電點(diǎn)為817。該蛋白序列中有7個(gè)半胱氨酸，可形成分子內(nèi)二硫鍵。蛋白在SwissProt登錄號(hào)P8381l(登錄時(shí)采用名稱為CAP)。關(guān)鍵詞；毛頭鬼