農(nóng)桿菌介導轉化棉花過程中畸形苗發(fā)生機理的研究.pdf

1、農(nóng)桿菌介導法轉化棉花是目前棉花轉基因的最主要的方法,但用此法轉化棉花后誘導成苗的過程中90﹪以上為畸形苗,這已成為棉花轉基因的瓶頸,嚴重制約著轉基因效率.該研究采用農(nóng)桿菌介導法轉化棉花纖維改良基因,得到抗卡那霉素植株,PCR驗證纖維改良基因已成功轉入棉花.優(yōu)化農(nóng)桿菌介導法轉化棉花的主要技術參數(shù),拓寬了棉花基因型范圍,建立了四個棉花品種的高效遺傳轉化體系.研究發(fā)現(xiàn)采用嫁接技術,可使轉基因植株成活率達到90﹪以上,可有效提高轉化成效.對棉花

2、胚狀體染色體制片技術進行了大量研究,摸索出了適合棉花胚狀體染色體制片的流程.染色體觀察發(fā)現(xiàn)不同品種的胚狀體均存在染色體變異,且以染色體數(shù)目介于27~52條的非整倍變異細胞為最多,不同品種的染色體變異率差別很大,胚胎發(fā)生能力弱的品種染色體變異率高.轉化后采用平行實驗得到不同品種的不同培養(yǎng)體系的愈傷組織、胚性愈傷組織、胚狀體、類胚狀體、畸形苗和正常苗,以最終正常苗誘導率高的體系的材料作為正常苗的發(fā)生過程,以誘導率低的作為畸形苗的發(fā)生過程,即

3、分為正常苗的發(fā)生過程,愈傷組織——球型胚狀體——心型胚狀體——魚雷型胚狀體階段——子葉型胚狀體——正常苗;畸形苗的發(fā)生過程,愈傷組織——類球型胚狀體——類心型胚狀體——類魚雷型胚狀體階段——類子葉型胚狀體——畸形苗.以測量大田種子形成過程和種子萌發(fā)過程中內源激素的動態(tài)變化做參照系,測量兩再生苗發(fā)生過程的不同發(fā)育時期的內源激素的動態(tài)變化,結果表明,黃綠色的胚性愈傷組織與球型胚為棉花體細胞胚胎發(fā)生的兩個關鍵時期,亦是兩個轉折點;畸形苗發(fā)生過