草莓β-1,4-葡聚糖酶基因的克隆與遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、該研究以目前國(guó)內(nèi)主栽品種豐香和章姬為試材,較為系統(tǒng)地研究了影響草莓離體再生的諸多因素,如外植體類型、外源激素種類、外植體生理狀態(tài)等,建立了草莓葉片高效離體再生體系,從而為草莓的遺傳轉(zhuǎn)化研究與應(yīng)用奠定了基礎(chǔ).試驗(yàn)結(jié)果表明:不同激素組合及配比對(duì)草莓葉盤不定芽再生有不同的影響.TDZ對(duì)芽再生的效果明顯比6-BA強(qiáng),豐香葉盤在MS+TDZ2.0mg/L+2,4-D0.1mg/L+IBA0.2mg/L分化培養(yǎng)基上芽再生頻率可達(dá)83.2％,平均每葉

2、盤再生芽數(shù)達(dá)1.4個(gè);章姬則在MS+TDZ4.0mg/L+NAA0.1mg/L+IBA0.2mg/L分化培養(yǎng)基上芽再生頻率可達(dá)65.7％,平均每葉盤再生芽數(shù)為1.3個(gè).同一基因型草莓葉盤再生效果比葉柄好,而其中又以10d左右葉齡的葉片再生能力最高.8.0mg/L AgNO<,3>能較好地控制外植體的褐化,促進(jìn)芽的分化.再生芽在1/2MS+IBA0.1mg/L生根培養(yǎng)基中,生根率達(dá)100％.該文還對(duì)草莓花藥離體培養(yǎng)進(jìn)行了研究,篩選出適合草

3、莓趙屯一號(hào)品種花藥培養(yǎng)最佳誘導(dǎo)愈傷組織培養(yǎng)基,即F+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+CH300mg/L,并成功誘導(dǎo)出再生芽獲得再生植株.這為草莓花藥脫毒培養(yǎng)和將來(lái)利用花藥進(jìn)行目的基因遺傳轉(zhuǎn)化研究提供了理論依據(jù).為了研究β-1,4-葡聚糖酶基因在草莓果實(shí)成熟過(guò)程中的作用及探討利用β-1,4-葡聚糖酶反義基因培育耐貯草莓新品種,從草莓果實(shí)中提取總RNA,根據(jù)Gen Bank中β-1,4-葡聚糖酶基因FaEG1和FaEG3序列設(shè)

4、計(jì)合成特異性引物,利用RT-PCR技術(shù)分別擴(kuò)增了兩個(gè)基因1491bp和1863bp的cDNA,反向插入到植物表達(dá)載體pROK2中,將該載體轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌AGL-1中,構(gòu)建了FaEG1和FaEG3的反義基因的表達(dá)載體.通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化草莓品種豐香和章姬后,從104塊抗卡那霉素轉(zhuǎn)化愈傷中隨機(jī)抽取24塊經(jīng)PCR檢測(cè),其中17塊擴(kuò)增出目的帶,PCR陽(yáng)性率為70.8％,初步證實(shí)這兩個(gè)基因整合到草莓染色體基因組中,抗Kan愈傷現(xiàn)已分化形成12個(gè)轉(zhuǎn)化