草莓離體再生及抗病基因轉(zhuǎn)化.pdf

1、該研究以"豐香"和"全明星"2個(gè)草莓品種為試材,研究了草莓基因型、激素配比、基本培養(yǎng)基、pH值、外植體、葉片放置方式對(duì)草莓不定芽再生的影響,優(yōu)化了草莓再生條件,獲得了"全明星"草莓葉片高效再生體系.通過(guò)葉片與農(nóng)桿菌共培養(yǎng)的方法,將抗真菌chi5B基因?qū)氩葺~片,并獲得了抗卡娜霉素的抗生植株,建立了"全明星"草莓的遺傳轉(zhuǎn)化體系.葉片再生試驗(yàn)結(jié)果表明,草莓基因型不同,其再生能力也不同."全明星"草莓的再生率明顯高于"豐香".培養(yǎng)基組成和激

2、素配比直接影響草莓再生,MS培養(yǎng)基與MS(無(wú)機(jī)成份)+B5(有機(jī)成份)相比,可得到較高的不定芽再生率,但差異不顯著.pH值、外值體、葉片放置方式也影響"全明星"草莓葉片的再生率,最佳pH值為5.8.用"全明星"草梅葉片和葉柄進(jìn)行不定芽再生試驗(yàn),發(fā)現(xiàn)葉片再生率明顯高于葉柄,葉片背面接觸培養(yǎng)基有利于葉片再生."全明星"草莓不定芽分化最適宜的培養(yǎng)基條件為MS+BA2.0mg/1+NAA0.2mg/1,蔗糖3%,瓊脂10%,pH值5.8,再生率

3、為64%.在建立"全明星"葉片不定芽再生體系的基礎(chǔ)上,利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化法進(jìn)行了"全明星"草莓的遺傳轉(zhuǎn)化研究.對(duì)轉(zhuǎn)化過(guò)程中的一些因素進(jìn)行了探討.結(jié)果表明:"全明星"葉片和不定芽對(duì)卡娜霉素的敏感試驗(yàn),得出最適篩選濃度為30mg/1;對(duì)羧芐青霉素的抑菌試驗(yàn),最適抑菌濃度為450mg/1;AS的加入可提高GUS的瞬時(shí)表達(dá)率;10-15分鐘是最適合葉片侵染的時(shí)間;共培養(yǎng)3天對(duì)葉片轉(zhuǎn)化比較合理.在上述適宜的轉(zhuǎn)化條件下,農(nóng)桿菌介導(dǎo)的"全明星"