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1、分類號(hào):Q279密級(jí):(秘密、機(jī)密、絕密)學(xué)校代碼:10057研究生學(xué)號(hào):08813016Surfactin體外抗腫瘤機(jī)理研究ResearchontheAntitumorMechanismofSurfactininVitro專業(yè)名稱:營(yíng)養(yǎng)與食品衛(wèi)生學(xué)(醫(yī))指導(dǎo)教師姓名:曹小紅教授(副教授)研究生姓名:趙思思申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:醫(yī)學(xué)碩士論文提交同期:2010年12月論文課題來(lái)源:國(guó)家項(xiàng)目學(xué)位授予單位:天津科技大學(xué)摘要實(shí)驗(yàn)采用的枯草芽孢桿菌Bac
2、illusnattoTK1發(fā)酵產(chǎn)生的脂肽——su渤ctin,被廣泛認(rèn)為是一種安全高效的生物表面活性劑。它具有顯著的抗菌,抗腫瘤,抗病毒及溶解血栓等功能,其中關(guān)于抗腫瘤和抗病毒功能的研究較少。課題組經(jīng)過(guò)前期實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),surfactin能夠通過(guò)線粒體途徑誘導(dǎo)MCF一7乳腺癌細(xì)胞發(fā)生凋亡。線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔(MPTP,簡(jiǎn)稱PT孔)作為細(xì)胞的“生命閘門(mén)”,在細(xì)胞凋亡過(guò)程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。本文主要探討PT孔在surfactin誘導(dǎo)的MCF7
3、乳腺癌細(xì)胞凋亡過(guò)程中的作用機(jī)理,以及ERK/MAPK通路與細(xì)胞增殖和凋亡的關(guān)系。surfactin誘導(dǎo)MCF一7乳腺癌細(xì)胞的PT孔開(kāi)放與細(xì)胞凋亡的關(guān)系及作用機(jī)理,以及,ERK/MAPK通路對(duì)于腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的影響。本論文以體外培養(yǎng)的人乳腺癌MCF7細(xì)胞株為研究對(duì)象,探討surfactin對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖和凋亡的作用,并深入探討相關(guān)的作用機(jī)理。體外增長(zhǎng)抑制實(shí)驗(yàn)表明,surfactin能顯著抑制MCF7乳腺癌細(xì)胞的增殖,這種抑制作用呈現(xiàn)出濃
4、度和時(shí)問(wèn)依賴關(guān)系,作用24h的IC50是402pg/mL,作用48h的IC50是323“∥mL。HE染色法和AO/EB、Hoechst33342/PI熒光雙染發(fā)現(xiàn),surfactin誘導(dǎo)MCF7細(xì)胞發(fā)生典型的凋亡形態(tài)學(xué)改變。實(shí)驗(yàn)采用激光共聚焦顯微鏡(LSCM)觀察發(fā)現(xiàn),經(jīng)surfactin作用后,MCF一7細(xì)胞內(nèi)的活性氧(ROS)水平和胞內(nèi)游離鈣離子(Ca2)水平顯著升高,這一趨勢(shì)分別可被ROS抑$O齊IJNAC和胞內(nèi)Ca2螯合劑BAP
5、7rA—AM所抑制,且Ca2水平的升高是lhROS的大量生成所致。同時(shí)發(fā)現(xiàn),ROS的升高將會(huì)導(dǎo)致PT孔的開(kāi)放,PT孔專一性抑制劑CsA可以抑制其開(kāi)放,PT孔的丌放直接引起線粒體跨膜電位(△甲m)的顯著降低,這一趨勢(shì)可被NAC、BAPTA—AM矛F(xiàn)ICsA所抑制。通過(guò)免疫印跡(Westernblotting)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),PT孔開(kāi)放后,線粒體內(nèi)細(xì)胞色素C(CytC)減少,而胞漿內(nèi)的CytC則逐漸增多,胞caspase一9蛋白的表達(dá)量也隨之增加
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