鹽生杜氏藻3-磷酸甘油脫氫酶基因在苜蓿中的轉(zhuǎn)化及檢測(cè).pdf

1、該文是在克隆獲得鹽生杜氏藻具調(diào)滲功能的3-磷酸甘油脫氫酶基因(DsGPD)的基礎(chǔ)上,應(yīng)用DsGPD進(jìn)行苜?？购的望}基因工程改造,目的是選育抗旱耐鹽苜蓿新品種,這將對(duì)于鹽堿化土地的改造和治理,擴(kuò)大優(yōu)質(zhì)豆科牧草苜蓿種植面積發(fā)揮極其重要的作用.取得的主要結(jié)果如下1.首先構(gòu)建了植物高效表達(dá)載體pCAMBIA2301G-DsGPD,成功地將該質(zhì)粒導(dǎo)入根癌農(nóng)桿菌(Agrobacterium tumefaciens)EHA105中;2.完成了苜蓿不同

2、轉(zhuǎn)化方法的優(yōu)化.通過(guò)直接侵染、超聲波震蕩、真空負(fù)壓法等農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化苜蓿的方法的優(yōu)化,葉片經(jīng)超聲波和負(fù)壓處理后,轉(zhuǎn)化效率分別為27.7﹪和22.2﹪,比直接浸染分別提高轉(zhuǎn)化效率1 50﹪和110﹪.愈傷組織電擊法以電壓650V/cm,電容50 uF的轉(zhuǎn)化條件為最佳,GUS染色獲得的藍(lán)色條帶數(shù)目最多;3.建立了苜蓿的轉(zhuǎn)化體系.采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法進(jìn)行DsGPD基因的苜蓿轉(zhuǎn)化.根癌農(nóng)桿菌侵染苜蓿外植體后,三月左右胚狀體萌發(fā)再生芽,通過(guò)誘導(dǎo)生

3、根獲得完整植株,生根率達(dá)到60﹪左右,最后將再生苗成功移過(guò)誘導(dǎo)生根獲得完整植株,生根率達(dá)到60﹪左右,最后將再生苗成功移栽到蛭石:沙(1:1)的培養(yǎng)介質(zhì)中培養(yǎng);4.比較了子葉、下胚軸、葉片的轉(zhuǎn)化效率.子葉和葉片更容易被轉(zhuǎn)化,分化率為17﹪左右.當(dāng)根癌農(nóng)桿菌菌液OD=0.3~0.5時(shí),愈傷組織形成率為60﹪~80﹪,效果較好;5.完成了轉(zhuǎn)基因植株的分子檢測(cè).獲得了轉(zhuǎn)DsGPD基因苜蓿植株102株,經(jīng)PCR檢測(cè)有21﹪的再生苗為陽(yáng)性.為進(jìn)一