大黃魚腎組織細(xì)胞系PCK的建立及其生物學(xué)特性.pdf

1、該研究從大黃魚的體細(xì)胞的原代培養(yǎng)入手,建立大黃魚體細(xì)胞系,以圖為大黃魚養(yǎng)殖業(yè)中業(yè)已存在的種質(zhì)、病害等問題的解決提供有效的技術(shù)手段采用健康的二齡大黃魚,參照左文功等方法進(jìn)行原代培養(yǎng):通過比較不同取材部位、取材方法、消化時(shí)間、血清等級(jí)及份數(shù)對(duì)原代培養(yǎng)結(jié)果的影響,試圖建立適于該實(shí)驗(yàn)室的海水魚細(xì)胞原代培養(yǎng)方法.按常規(guī)方法進(jìn)行傳代培養(yǎng),建立穩(wěn)定的細(xì)胞系,參照陳容敏等方法對(duì)所建腎組織細(xì)胞系進(jìn)行生物學(xué)特性研究;并研究了不同血清份數(shù)對(duì)該細(xì)胞系生長(zhǎng)的影響

2、.參照Alva..MC尤峰等方法進(jìn)行染色體的制備:參照張念慈等方法進(jìn)行細(xì)胞保存的研究.結(jié)果表明:(1)體細(xì)胞的原代培養(yǎng).通過對(duì)二齡大黃魚進(jìn)行原代培養(yǎng)實(shí)驗(yàn),成功獲得大黃魚的吻端、腎臟、肝臟及背鰭的原代細(xì)胞、肝組織原代細(xì)胞培養(yǎng)方法是消化法,0.25%胰蛋白酶消化70min,M199培養(yǎng)基+20%FBS或NBS.腎組織細(xì)胞原代培養(yǎng)方法是組織塊法或消化法,0.25%胰蛋白酶消化70min,M199培養(yǎng)基+20%FBS或NBS.吻端、鰭、鰓等組織

3、細(xì)胞的原代培養(yǎng)方法是組織塊法,M199+20%NBS或FBS.(2)大黃魚腎細(xì)胞經(jīng)過18個(gè)月傳75代,建立穩(wěn)定的成纖維樣細(xì)胞大黃魚腎細(xì)胞系,命名為PCK該細(xì)胞系適合在含5%~10%的新生牛血清(NBS)的M199培意養(yǎng)基中生長(zhǎng),適生長(zhǎng)溫度20~30℃,pH6.5~7.2,平均傳代間隔時(shí)間為3d.(3)PCK細(xì)胞系為成纖維樣細(xì)胞系:可以適于5-10%的NBS培養(yǎng):最適宜溫度范圍在25~28℃:62代PCK細(xì)胞的倍增時(shí)間為55.7h;低溫保

4、存的程序?yàn)? ℃平衡1h,70℃過夜,液氮口過渡后投入液氮;第11代細(xì)胞染色體數(shù)目變化范圍在31~55之間,模式染色體數(shù)為18,屬正常二倍體.63代PCK細(xì)胞染色體數(shù)目在32~86之間,正常染色體(2n=48)占統(tǒng)計(jì)量的14%,為異倍體細(xì)胞系.中國(guó)的細(xì)胞培養(yǎng)工作自張念慈等報(bào)導(dǎo)了中國(guó)第一株魚類細(xì)胞株的建立以后有了快速的發(fā)展,但主要工作還集中于淡水魚的研究,而海水魚的細(xì)胞培養(yǎng)鮮有報(bào)導(dǎo).近年來隨著海水養(yǎng)殖業(yè)的迅猛發(fā)展,對(duì)海水魚細(xì)胞培養(yǎng)工作產(chǎn)生