致斷奶仔豬腹瀉、水腫病大腸桿菌F18菌毛a因子單克隆抗體的研制及其初步應(yīng)用.pdf

1、以表達(dá)F18ac菌毛參考菌株2134(O157:H19)為材料,摸索出了F18ac菌毛表達(dá)的最佳條件,采用熱洗脫法使菌毛脫落,經(jīng)硫酸銨沉淀、透析后離心收集沉淀,經(jīng)SDS-PAGE鑒定,獲得了較純的F18ac菌毛,其主要亞單位分子量約為17kD.將粗提的F18ac菌毛免疫BALB/c小鼠,利用淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù),用直接玻板凝集試驗(yàn)篩選出1株雜交瘤細(xì)胞株19B4,它能穩(wěn)定分泌針對(duì)F18ac菌毛和F18ac菌毛共同的抗原表位a因子的單克降抗體

2、,細(xì)胞培養(yǎng)上清對(duì)F18ac菌毛參考菌株2134和F18ac菌毛的參考菌株107/86的直接凝集價(jià)均可達(dá)1:8,腹水單抗直接凝集效價(jià)可達(dá)1:1024.特異性檢測(cè)結(jié)果顯示,該單抗與表達(dá)了F18ac菌毛參考菌株2134和F18ac菌毛的參考菌株107/86都能發(fā)生凝集反應(yīng),而與豬源產(chǎn)F4、F5、F6和F41粘附素大腸桿菌菌株、雞源產(chǎn)Ⅰ型菌毛大腸桿菌菌株及沙門氏菌不發(fā)生凝集反應(yīng).免疫印跡試驗(yàn)表明,腹水單抗可同時(shí)特異識(shí)別F18ac菌毛17kD和F

3、18ac菌毛15kD左右的主要亞單位多肽.上述試驗(yàn)證實(shí)我們研制的單抗所針對(duì)的抗原表位是F18菌毛的a因子.應(yīng)用我們所研制的單抗對(duì)215株斷奶仔豬腹瀉大腸桿菌分離株進(jìn)行了檢測(cè),結(jié)果顯示:上述分離株的TSB培養(yǎng)中F18菌毛的檢出率為13.4％,TSA培養(yǎng)物的檢出率為8.4％.F18菌毛陽(yáng)性分離株的O血清型除了常見血清型O139、O141外,還有非常見血清型O107和O131.分離株TSB培養(yǎng)物的檢出率明顯高于TSA培養(yǎng)物的檢出率,表明豬源大