大腸桿菌不耐熱腸毒素對新城疫疫苗的免疫增強作用研究.pdf

1、該實驗利用該課題組構建的表達LT突變體基因的質粒pLTR72(質粒的LT基因中編碼第72位丙氨酸的密碼子GCA被替換成為編碼精氨酸的密碼子AGA)和天然LT質粒pLT分別轉化大腸桿菌JM101,接種于LB培養(yǎng)基中培養(yǎng),然后裂解菌體,純化蛋白LTR72和LT,用間接ELISA法檢測目的蛋白的表達情況.結果表明,LB培養(yǎng)基可以表達質粒pLTR72和質粒pLT中的LT突變體基因及LT基因,并可將產物分泌到大腸桿菌胞質中,成為具有GM1結合活性

2、的突變體LT和天然LT,而且二者在活性上無差異;將純化蛋白LT和LTR72進行SDS-PAGE電泳,結果顯示,純化的突變體LT蛋白和天然LT蛋白的結構相似,都是由A、B二亞單位組成;在兔腸袢結扎試驗中,天然LT的毒性最大,突變體LT72的毒性很小,接近于陰性對照的水平.將不同劑量的單純LTR72接種于1日齡健康雛雞,結果顯示,接種100 μ g范圍內對雞安全可靠,無不良反應,單純LTR72免疫后對ND HI抗體效價無影響,但能非特異性地

3、刺激雞體內淋巴細胞活性增強.通過用不同劑量LTR72協(xié)同疫苗免疫后檢測ND抗體的水平,確定疫苗中LTR72的最佳用量為25 μ g.將LTR72與ND La Sota疫苗混合后進行雛雞免疫試驗,結果表明,無論是高母源抗體免疫組,還是低母源抗體免疫組,LTR72-ND疫苗組的HI抗體效價均明顯高于單純疫苗組(P<0.05);在高母源抗體時,LTR72-ND疫苗組的有效免疫期比單純疫苗組延長1周,在低母源抗體時延長了2周.這些結果充分說明,