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1、Bt25是中國自行分離的對小菜蛾具有高毒力的蘇云金芽抱桿菌,經(jīng)PCR-RFLP系統(tǒng)鑒定它含有crylAa基因.以全長基因PCR產(chǎn)物的粘端定向克隆的方法,設(shè)計一對特異引物,以Bt25質(zhì)粒DNA為模板擴增cry1Aa全長基因.序列測定結(jié)果表明該基因編碼區(qū)為3552 bps,編碼1183個氨基酸,分子量為133.7kDa,等電點為p14.755.該基因序歹記在GenBank注冊,Accession number 為AYl97341,并被國際B
2、t殺蟲晶體蛋白基因命名委員會正式命名為.cry1Aa14.在氨基酸序列918~1180間,和以知的13種cry1AA的11種(不包括cry1Aa和,crt1Aa13)存在22或23個氨基酸的差異(其中1094~1097的4個氨基酸無對應(yīng)序列),而這段區(qū)域和cry1Ab氨基酸序列的對應(yīng)區(qū)域無差異.cry1Aa14全長基因插入Bt表達載體,獲得了重組表達質(zhì)粒pBYB1,轉(zhuǎn)化大腸桿菌SCS110和Bt無晶體突變株HD73cry,經(jīng)過抗性篩選、
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