櫛孔扇貝亞種間雜交機制的研究——同工酶分析.pdf

1、利用同工酶技術(shù),對中國櫛孔扇貝和日本櫛孔扇貝的遺傳差異進行了比較分析,并對它們的正反交后代的酶表型及遺傳型進行了分析,探討了亞種間雜交的機制.探索了櫛孔扇貝亞種間雜交育種的方法,建立了櫛孔扇貝同工酶的提取體系及電泳條件和染色體系.確立最佳提取體系是:親本取閉殼肌組織0.8g,加入酶提取液(預(yù)冷重蒸水含0.05％巰基乙醇)3ml;子代稚貝去殼,取外套膜和內(nèi)臟團,加入酶提取液100μl,冰浴下于勻漿器中研磨,勻漿液4℃,13,000r/mi

2、n,離心30min,取上清液分裝,加入溴酚藍指示劑,-20℃冰箱保存;最佳電泳體系是:不連續(xù)聚丙烯酰胺凝膠電泳:凝膠濃度是濃縮膠T=3.6％,分離膠T=8.2％,電壓是濃縮膠300伏分離膠200伏,電泳4-5小時,結(jié)束后立即進行不同種酶的染色.檢測了中日櫛孔扇貝親本種群的6種同工酶,得到了穩(wěn)定的酶譜并對其進行了遺傳統(tǒng)計分析.中親本種群的多態(tài)位點比例(P.99)為41.18％,平均雜合度觀測值(Ho)為0.1295,平均雜合度預(yù)期值(He

3、)為0.1695,各位點平均等位基因數(shù)(Ne)為1.5294.日本親本種群檢出的多態(tài)位點比例(P.99)為4 5.45％.平均雜合度觀測值(Ho)為0.1531,平均雜合度預(yù)期值(He)為0.2331,各位點平均等位基因數(shù)(Ne)為1.6363.結(jié)果表明引進的日本種群的遺傳多樣性較中國種群豐富,將其作為引進種用于資源改良是可行的.在四組子代個體中,共檢測了12種同工酶.其中有9種同工酶在四組子代個體中均有表達,得到了穩(wěn)定清晰的酶譜,另外

4、3種酶在所有個體中均未表達或表達極微弱.統(tǒng)計結(jié)果表明:日雄中雌雜交組的平均雜合度最高,為0.1727,其次是日雌中雄雜交組0.1536,日自交組最低,為0.1055,中自交組為0.1273.各組的平均雜合度預(yù)期值也表現(xiàn)出該趨勢,即:日自交組最低,為0.1786,日雄中雌雜交組的平均雜合度最高,為0.1964,日雌中雄雜交組和中自交組分別是0.1891和0.1865.Hardy-weinberg平衡下遺傳偏離指數(shù)也是雜交組的小于自交組的,

5、平均每個位點的等位基因有效數(shù)目中自交組最高為1.7318,日自交組最低為1.6718,兩雜交組群體的這一指數(shù)相差不多,分別是1.6955和1.6927,位于兩親本的中間水平.由此可以看出在此四組中,雜交組的遺傳變異明顯高于自交組的,雜種優(yōu)勢已初步顯示出來.而在兩雜交組中,日雄中雌雜交組又優(yōu)于日雌中雄組中自交組.群體間遺傳相似系數(shù)和遺傳距離及聚類分析結(jié)果表明:兩雜交組間的遺傳相似系數(shù)最大,遺傳距離最小,僅為0.0066,而中自交組群體與日