馬尾松毛蟲質(zhì)型多角體病毒P44、P50蛋白的表達(dá)與定位.pdf

1、馬尾松毛蟲以松針為食，是一種危害較大的森林害蟲。馬尾松毛蟲質(zhì)型多角體病毒(Dendrolimus punctatus cytoplasmic polyhedrosis virus，DpCPV)是馬尾松毛蟲的病原微生物，為我國特有物種。DpCPV在農(nóng)業(yè)方面的主要用途是用做微生物殺蟲劑，具有安全、高效、無污染的特性。DpCPV的增殖主要通過直接感染目的昆蟲的方式，但是受外界環(huán)境影響較大。目前對(duì)馬尾松毛蟲質(zhì)型多角體病毒的研究主要集中在對(duì)病毒自

2、身核苷酸序列及其結(jié)構(gòu)的分析，而對(duì)有關(guān)核酸編碼蛋白的修飾、定位和功能的研究報(bào)道卻較少。因此深入研究DpCPV結(jié)構(gòu)蛋白的修飾機(jī)制，將有助于了解病毒入侵機(jī)制，為后續(xù)馬尾松毛蟲病毒制劑的生產(chǎn)與蟲害的防治工作提供理論依據(jù)。
　　本研究通過分別構(gòu)建DpCPV的P44和P50蛋白的原核和真核表達(dá)載體，實(shí)現(xiàn)兩者原核表達(dá)和真核共表達(dá)，研究兩者的相互作用，并對(duì)P50蛋白在昆蟲細(xì)胞內(nèi)的定位進(jìn)行探究。
　　研究結(jié)果顯示：DpCPV s7編碼的結(jié)構(gòu)蛋

3、白P50和s8編碼的非結(jié)構(gòu)蛋白P44在大腸桿菌內(nèi)成功表達(dá)，與理論的蛋白分子量大小一致；免疫家兔制備多克隆抗體分別和相應(yīng)的蛋白進(jìn)行免疫印跡反應(yīng)，鑒定了多克隆抗體的特異性；在昆蟲細(xì)胞Sf9中實(shí)現(xiàn)了P50和P44蛋白的共表達(dá)。P50在真核細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的蛋白大小與在原核細(xì)胞內(nèi)表達(dá)蛋白的大小一致，P44在真核內(nèi)表達(dá)的大小比原核表達(dá)的略小?？梢娫诶ハxSf9細(xì)胞內(nèi)，P50蛋白不能自我剪切修飾，同時(shí)也表明P44蛋白未參與P50蛋白的切割修飾。利用激光共聚

4、焦顯微鏡觀察P50-eGFP的融合蛋白亞細(xì)胞定位發(fā)現(xiàn)，P50蛋白定位于細(xì)胞質(zhì)中。
　　本研究初步探索了DpCPV不同片段所編碼的蛋白間的相互作用，同時(shí)對(duì)P50在昆蟲細(xì)胞中的定位進(jìn)行了探究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果為后續(xù)研究P50蛋白的切割修飾機(jī)制提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，同時(shí)也為探究DpCPV非結(jié)構(gòu)蛋白與結(jié)構(gòu)蛋白的相互作用提供了方法學(xué)參考，而對(duì)P50蛋白的定位研究則為研究其他RNA病毒中的結(jié)構(gòu)蛋白表達(dá)定位提供了可參考的方法，本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果數(shù)據(jù)為探索DpCPV侵