葡萄中赭曲霉毒素A產(chǎn)生菌的篩選及其產(chǎn)毒機(jī)制研究.pdf

1、赭曲霉毒素A（OTA）是一種主要由赭曲霉、青霉及黑曲霉菌中的某些菌株產(chǎn)生的次級(jí)代謝產(chǎn)物，具有多種毒性，在全球范圍內(nèi)，葡萄及其制品中的OTA污染普遍存在，嚴(yán)重影響人類和動(dòng)植物的健康。對(duì)于控制OTA的方法已經(jīng)有許多研究，其中生物方法安全環(huán)保是目前研究的熱點(diǎn)，而認(rèn)識(shí)OTA來源及其產(chǎn)生機(jī)制是生物防治污染的基礎(chǔ)。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，對(duì)于毒素的合成途徑和機(jī)制的認(rèn)識(shí)正在逐步加深，一些新型的分子生物學(xué)方法已經(jīng)被應(yīng)用于機(jī)制研究中，并通過這些研究成果開發(fā)

2、出具有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值的快速檢測(cè)和降低毒素產(chǎn)生的方法。而產(chǎn)生OTA的菌株種類繁多，且其分布因地域和氣候而異，需要豐富OTA產(chǎn)毒菌的數(shù)據(jù)庫以尋求廣譜性且有效的控制產(chǎn)毒的方法，以期降低OTA污染。
　　本課題在鎮(zhèn)江句容的生態(tài)葡萄園里篩選到幾株產(chǎn)毒菌株，選取了其中產(chǎn)毒量最高的X9-4灰黃青霉為研究對(duì)象，進(jìn)一步研究環(huán)境對(duì)其生長(zhǎng)和產(chǎn)毒的影響，并通過產(chǎn)毒和不產(chǎn)毒條件下蛋白與基因表達(dá)差異探究了灰黃青霉中赭曲霉毒素A產(chǎn)生的機(jī)制。主要研究結(jié)果如下：

3、r>　　1.利用熒光現(xiàn)象初篩和高效液相熒光檢測(cè)法復(fù)篩，并使用液質(zhì)聯(lián)用分析鑒定代謝產(chǎn)物，從鎮(zhèn)江市句容葡萄園篩選到幾株產(chǎn)毒菌，其中一株取樣自巨峰葡萄品種腐爛果實(shí)上的霉菌X9-4產(chǎn)毒量最高，進(jìn)行5.8S rDNA-ITS序列測(cè)序分析，并結(jié)合其形態(tài)學(xué)特征鑒定該菌株為灰黃青霉（Penicillium griseofulvum）。
　　2.對(duì)分離到的灰黃青霉X9-4產(chǎn)毒菌進(jìn)行生長(zhǎng)和產(chǎn)毒條件（如溫度、培養(yǎng)基、pH值、光照等）的研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明

4、，該菌株灰黃青霉在pH為5的CYA培養(yǎng)基中25 ℃下避光培養(yǎng)兩周時(shí)毒素含量最高，此條件下生長(zhǎng)良好。灰黃青霉X9-4在低溫下不生長(zhǎng)，在非生長(zhǎng)適宜溫度環(huán)境，極酸或堿性環(huán)境，光照等條件下其產(chǎn)毒能力受到抑制。
　　3.利用蛋白質(zhì)組學(xué)的方法，以灰黃青霉X9-4為研究對(duì)象，分別在pH為3（抑制產(chǎn)毒）和5（高產(chǎn)毒）的培養(yǎng)條件下，分析影響其產(chǎn)毒能力的差異蛋白。得到一些影響其產(chǎn)毒能力的相關(guān)蛋白，這些蛋白分屬于“基礎(chǔ)代謝與合成相關(guān)蛋白”、“能量供應(yīng)相