利用粉紅聚端孢幾丁質(zhì)酶Trchi1基因和嗜熱真菌Mnsod基因提高水稻抗性的研究.pdf

1、幾丁質(zhì)酶(Chitinase)被普遍認(rèn)為是一種與抗真菌病害有關(guān)的酶。菌寄生真菌產(chǎn)生的幾丁質(zhì)酶可以降解真菌的細(xì)胞壁，對(duì)病原真菌的菌絲生長(zhǎng)、孢子萌發(fā)和芽管伸長(zhǎng)有抑制作用。轉(zhuǎn)真菌幾丁質(zhì)酶基因的作物具有較高的抗病性，且抗病性持久、抗病譜廣，還可以提高抗蟲能力。超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase，SOD)能夠催化超氧陰離子(O2·-)發(fā)生歧化反應(yīng)，從而清除O2·-，使生物體能夠防御氧化損傷。植物在遭受到包括高鹽、干旱、低溫和

2、高溫等環(huán)境脅迫時(shí)可產(chǎn)生大量活性氧?；钚匝跄軌蚱茐募?xì)胞內(nèi)的大分子，使DNA裂解，造成膜的損傷或影響蛋白質(zhì)的合成及穩(wěn)定性等，影響植物生長(zhǎng)發(fā)育。SOD通過清除細(xì)胞內(nèi)的活性氧、減少細(xì)胞內(nèi)部的活性氧累積，可以減輕逆境對(duì)植物細(xì)胞的傷害，對(duì)增強(qiáng)植株的耐鹽等抗逆能力具有重要作用。粉紅聚端孢(Trichothecium roseum)是一種重要的重寄生真菌，它能有效抑制多種植物病原真菌的擴(kuò)展和危害，產(chǎn)生的胞外幾丁質(zhì)酶能夠參與重寄生和抗性互作的過程。疏綿狀

3、嗜熱絲孢菌（Thermomyces lanuginosus）和嗜熱子囊菌光孢變種（Thermoascusaurantiacus var.levisporus）是廣泛分布的，生長(zhǎng)上限溫度較高的嗜熱真菌，從這二種真菌中已分離了多種嗜熱酶，具有較高的研究和應(yīng)用價(jià)值。
　　本實(shí)驗(yàn)從前人已保存的菌種中，通過特異性擴(kuò)增得到粉紅聚端孢(T.roseum)幾丁質(zhì)酶trchi1基因，疏綿狀嗜熱絲孢菌(T.lanuginosus)zjmnsod酶基因

4、，嗜熱子囊菌光孢變種（T.Zlevisporus）esjmnsod酶基因。為了驗(yàn)證粉紅聚端孢幾丁質(zhì)酶基因trchi1，疏綿狀嗜熱絲孢菌zjmnsod和嗜熱子囊菌光孢變種esjmnsod基因的功能，將trchi1zjmnsod及esjmnsod基因分別構(gòu)建到MaizeUbiquitin啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的植物表達(dá)載體pCAMBIA1300中，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化水稻。經(jīng)PCR和RT-PCR檢測(cè)表明粉紅聚端孢幾丁質(zhì)酶基因trchi1疏綿狀嗜熱絲孢菌