菠蘿蜜成熟軟化相關(guān)酶基因表達及β-半乳糖苷酶基因克隆和序列分析.pdf

1、果實的成熟軟化是一個復雜的生理過程,與果實的質(zhì)地品質(zhì)發(fā)育及采后的貯藏運輸?shù)榷加兄置芮械年P(guān)系。本研究利用篩選出的內(nèi)參基因,分析了多聚半乳糖醛酸酶基因、果膠甲酯酶基因、果膠甲酯酶抑制子基因、纖維素酶基因、ɑ-半乳糖苷酶基因、β-半乳糖苷酶基因、阿拉伯呋喃糖苷酶基因、ɑ-甘露糖苷酶基因、β-甘露糖苷酶基因、ɑ-淀粉酶基因、β-淀粉酶基因和酸性蔗糖酶基因等12個基因在干苞菠蘿蜜(GHsj12D and GHsj12G)和濕苞菠蘿蜜(GHsj

2、12As and GHsj12Cs)果實成熟軟化過程中的表達,并用RACE技術(shù)克隆到了β-半乳糖苷酶基因cDNA全長,并對其進行了生物信息學分析,結(jié)果如下:
　　1)分析了5個內(nèi)參基因在不同菠蘿蜜組織中的表達穩(wěn)定性,結(jié)果表明,果實中最穩(wěn)定的3個內(nèi)參基因是UBQ、GAPDH、18S rRNA;葉片中最穩(wěn)定的3個內(nèi)參基因是UBQ、GAPDH、β-tubulin;花序中最穩(wěn)定的3個內(nèi)參基因是UBQ、GAPDH、ɑ-tubulin。

3、>　　2)基因表達分析結(jié)果顯示,ɑ-甘露糖苷酶基因、β-甘露糖苷酶基因和ɑ-淀粉酶基因可能在菠蘿蜜果實成熟軟化中起到重要作用,多聚半乳糖醛酸酶基因、果膠甲酯酶基因、果膠甲酯酶抑制子基因、纖維素酶基因、ɑ-半乳糖苷酶基因、β-半乳糖苷酶基因、阿拉伯呋喃糖苷酶基因、β-淀粉酶基因和酸性蔗糖酶基因不是導致菠蘿蜜果實快速成熟軟化的主要基因,其中ɑ-淀粉酶基因和β-淀粉酶基因可能與菠蘿蜜果實質(zhì)地和品質(zhì)的形成有關(guān)。
　　3)從菠蘿蜜果實中克隆

4、到β-半乳糖苷酶基因cDNA全長,分析表明,其全長為3264 bp,開放閱讀框(ORF)2574 bp,編碼857個氨基酸殘基,編碼蛋白質(zhì)預測分子量95.4538 KD,理論等電點8.88,為堿性蛋白質(zhì);該蛋白屬于糖基水解酶35家族,具有糖基水解酶和半乳糖凝集素等保守結(jié)構(gòu)域,亞細胞定位于線粒體,具有信號肽序列和多個跨膜螺旋區(qū),有19個功能位點和27個磷酸化位點(Ser12個,Thr9個,Tyr6個)。二級結(jié)構(gòu)由ɑ-螺旋、β-折疊、延伸鏈