Xist基因調(diào)控及對牛SCNT早期胚胎發(fā)育的影響.pdf

1、Xist是產(chǎn)生一個非編碼RNA的與X染色體相關(guān)的基因，它是在合子期基因組開始激活，并且是胚胎早期發(fā)育表達(dá)的第一個印記基因。盡管Xist是在雌性動物中參與X染色體失活，但Xist RNA的功能尚未被完全認(rèn)知。在動物克隆胚胎發(fā)育中許多基因表達(dá)異常，Xist也是這些異常表達(dá)基因之一。前期研究表明，利用Xist基因缺陷型供體細(xì)胞用于克隆實(shí)驗(yàn)，可成功將小鼠克隆效率提高8-9倍。本實(shí)驗(yàn)探討了TALER載體轉(zhuǎn)染到胎牛成纖維細(xì)胞調(diào)控ist基因表達(dá)的可行

2、性，并且以抑制Xist基因表達(dá)的細(xì)胞作為供體制作克隆胚胎，研究Xist基因調(diào)控對?？寺∨咴缙诎l(fā)育影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)特異性抑制Xist表達(dá)載體TALER轉(zhuǎn)染雌性胎牛成纖維細(xì)胞，并用mCherry作為載體轉(zhuǎn)染效率檢測的報(bào)告基因。通過流式細(xì)胞儀進(jìn)行分選獲得陽性細(xì)胞后直接提取RNA，反轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增cDNA，與同一來源細(xì)胞系進(jìn)行Real time RT-PCR對Xist表達(dá)水平檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞ist相對表達(dá)量下調(diào)93.85％，說明

3、本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的載體轉(zhuǎn)染系統(tǒng)能夠有效限制Xist基因的表達(dá)。選取ist基因抑制表達(dá)陽性的轉(zhuǎn)染細(xì)胞用于體細(xì)胞核移植實(shí)驗(yàn)，同時(shí)用未經(jīng)處理的細(xì)胞作為對照，實(shí)驗(yàn)組和對照組的卵裂率、8細(xì)胞發(fā)育率、桑葚胚發(fā)育率和囊胚發(fā)育率分別為78.8％ vs75.1％（P＞0.05，無顯著差異）、54.4％ vs50.6％（P＞0.05，無顯著差異）、12.3％ vs27.8％(P＜0.01，差異極顯著）、0 vs26.6％（P＜0.01，差異極顯著）。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果