犬細(xì)小病毒乳膠凝集快速檢測(cè)方法的建立和應(yīng)用.pdf

1、犬細(xì)小病毒病是對(duì)寵物臨床上危害較大的傳染病之一，我國(guó)徐漢坤在1983年首次報(bào)道了犬細(xì)小病毒病，雖然該病出現(xiàn)至今只有30年時(shí)間，但是該病發(fā)病比較急、死亡率比較高，給養(yǎng)犬業(yè)帶來(lái)了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。
　　 CPV是單鏈DNA病毒，但變異速率與RNA病毒相當(dāng)，目前已經(jīng)出現(xiàn)了三個(gè)亞型，即CPV-2a、CPV-2b、CPV-2c。根據(jù)臨床癥狀表現(xiàn)主要分為腸炎型和心肌炎型兩種類型。但現(xiàn)在心肌炎型很少見(jiàn)，以腸炎型為主。臨床上寵物醫(yī)院對(duì)該病的診斷主

2、要使用進(jìn)口的膠體金試紙條，成本比較高。本研究旨在建立一種犬細(xì)小病毒乳膠凝集快速檢測(cè)方法，為寵物臨床提供一種快速、簡(jiǎn)單、便宜的檢測(cè)方法。
　　 本研究運(yùn)用本實(shí)驗(yàn)室制備的抗CPV-2b亞型單克隆抗體，致敏羧化乳膠顆粒，用單抗致敏乳膠，摸索偶聯(lián)的最佳條件，包括致敏的抗體量和致敏時(shí)間等。乳膠檢測(cè)試劑自身穩(wěn)定、特異性好、敏感度高，最終建立了一種犬細(xì)小病毒乳膠凝集檢測(cè)試劑和檢測(cè)方法，并對(duì)臨床樣品進(jìn)行了檢測(cè)。
　　 在武漢市的寵物醫(yī)院

3、采集了病料150份，其中有91份病料接種F81細(xì)胞，提取DNA模板，PCR擴(kuò)增583bp的片段，經(jīng)測(cè)序后結(jié)果顯示有72份是CPV-2a亞型(79.1％)，9份是CPV-2b亞型(9.9％)。
　　 用本研究制備的CPV乳膠凝集檢測(cè)試劑對(duì)采集的臨床樣品進(jìn)行了檢測(cè)，并與膠體金及PCR方法進(jìn)行了比較。91份用膠體金檢測(cè)陽(yáng)性的病料，經(jīng)細(xì)胞傳代獲得的F1代病毒，用PCR檢測(cè)陽(yáng)性率88％，乳膠凝集檢測(cè)陽(yáng)性率84％;另外57份病料F0代檢測(cè)結(jié)

4、果:用膠體金和乳膠凝集檢測(cè)都為陽(yáng)性的有48份，都為陰性的有4份，兩者的符合率為91.23％。
　　 綜上所述，本研究建立了一種犬細(xì)小病毒乳膠凝集快速檢測(cè)方法，該方法可以檢出CPV-2a及CPV-2b的感染，并對(duì)臨床樣品進(jìn)行了檢測(cè)。在武漢進(jìn)行的關(guān)于犬細(xì)小病毒的分子亞型的調(diào)查顯示，武漢地區(qū)流行的犬細(xì)小病毒主要是以CPV-2a亞型為主，并正向CPV-2b亞型進(jìn)化。本研究為華中地區(qū)犬細(xì)小病毒病的預(yù)防和治療提供了一定的理論依據(jù)，為臨床CP