薔薇屬三物種MYB基因生物信息學(xué)分析與玫瑰MYB基因克隆及超表達(dá)載體的構(gòu)建.pdf

1、月季(Rosa chinensis)、玫瑰(Rosa rugosa)和野薔薇(Rosa multiflora)為薔薇科(Rosaceae)薔薇屬(RosaL.)的三個(gè)物種，是世界著名的觀賞植物之一。月季因其花型秀美，耐修剪能力強(qiáng)，在我國(guó)廣泛栽培。玫瑰、野薔薇也都具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。雖然月季、玫瑰和野薔薇之間的親緣關(guān)系相對(duì)較近，但它們?cè)谛螒B(tài)上有明顯差異。目前為止對(duì)薔薇屬植物的研究，大多數(shù)報(bào)道集中在植物的再生和遺傳轉(zhuǎn)化上，而對(duì)月季玫瑰等薔薇

2、屬植物跟花色花香相關(guān)基因的研究甚為缺乏。
　　 本研究對(duì)月季、玫瑰和野薔薇的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)進(jìn)行生物信息學(xué)分析，將薔薇屬三物種的MYB類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子與其他模式物種進(jìn)行聚類(lèi)分析和表達(dá)譜分析，從轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果中篩選出全長(zhǎng)MYB基因的序列，設(shè)計(jì)引物，從玫瑰基因組DNA或cDNA文庫(kù)中擴(kuò)增得到包含全長(zhǎng)CDS的玫瑰MYB基因，再挑選全長(zhǎng)的玫瑰MYB基因分別構(gòu)建超量表達(dá)載體。主要的研究結(jié)果如下:
　　 1.從草莓基因組中共鑒定出198個(gè)MYB

3、家族基因，并統(tǒng)一命名，對(duì)其基因結(jié)構(gòu)以及在染色體上的分布進(jìn)行了比較分析，發(fā)現(xiàn)基因中內(nèi)含子數(shù)目從0-19個(gè)不等，在各染色體上分布并不均勻，在第6和第5號(hào)染色體上分布最多且在染色體兩端分布最密集。
　　 2.從薔薇屬三物種月季，玫瑰和野薔薇轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中共得到了79不同的全長(zhǎng)MYB基因。其中，屬于1R類(lèi)型的MYB基因有34個(gè)。將這79個(gè)基因在薔薇屬三物種中進(jìn)行差異表達(dá)分析，發(fā)現(xiàn)在任意兩個(gè)物種中至少有37個(gè)MYB基因的表達(dá)量差異顯著。同時(shí)

4、，將這些基因與草莓和擬南芥中的MYB基因家族進(jìn)行了系統(tǒng)發(fā)育分析。
　　 3.從玫瑰轉(zhuǎn)錄組中挑選出5個(gè)擁有全長(zhǎng)CDS區(qū)的MYB基因，以玫瑰基因組DNA或cDNA文庫(kù)為模板，擴(kuò)增出全長(zhǎng)基因。其中屬于1R類(lèi)型MYB基因的為RrMYB2和RrMYB10，屬于R2R3類(lèi)型MYB基因的為RrMYB3，RrMYB6和RrMYB8。
　　 4.將以玫瑰基因組DNA為模板擴(kuò)增的RrMYB8，以玫瑰cDNA文庫(kù)為模板擴(kuò)增的RrMYB2，Rr