CcARF基因在山核桃嫁接過程中的功能分析.pdf

1、ZhejiangAgricultureandForestryUniversityDissertationfortheDegreeofMasterFunctionalanalysisofauxinresponsefactorgeneCcARFinhickory(Caryacarthayensis)duringgraftprocessCandidate：JiaFangSupervisor：BingsongZhengSpeciality：Si

2、lvicultureDateofSubmission：June，2013ZhejiangAgricultureLintanlZhejiangandForestryUniversityProvince，PRChinaJune，2013g摘要摘要山核桃(CaryacathayensisSarg)為胡桃科(Juglandaceae)山核桃屬(CaryaNutt)的木本油料樹種，作為浙西北的特色干果，經(jīng)濟(jì)價(jià)值很高，是山區(qū)農(nóng)民脫貧致富的經(jīng)濟(jì)支柱之

3、一。但是山核桃存在童期長，樹體高大，不易采收，良種化以及園藝化栽培困難等問題，構(gòu)成了山核桃產(chǎn)業(yè)發(fā)展的一個(gè)巨大瓶頸。植物嫁接作為植物無性繁殖中的一項(xiàng)重要園藝栽培技術(shù)，是解決山核桃良種化和園藝化栽培的主要手段。隨著嫁接技術(shù)的逐步發(fā)展，人們已經(jīng)不單純滿足研究嫁接技術(shù)，開始探討嫁接較深層次的問題，以便更好的指導(dǎo)嫁接。本文根據(jù)cDNAAFLP技術(shù)獲得的山核桃生長素響應(yīng)因子(C鰣燈)基因片段克隆獲得cDNA全長，同時(shí)進(jìn)行同源性比較和系統(tǒng)樹分析，并利

4、用qRTPCR，WesternNoR分析在嫁接過程中CcARF基因在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平的表達(dá)情況，并進(jìn)行IAA氧化酶活性檢測，探討CcARF與激素之間的關(guān)系，完善山核桃嫁接過程中調(diào)控網(wǎng)絡(luò)機(jī)制i主要研究結(jié)果如下：1、利用改良的CTABTrizol，Trizol，RNAisomateforPlantTissue試劑盒法提取嫁接樣品總RNA，改良的CTABTrizol提取的總RNA質(zhì)量高、完整性好、雜質(zhì)少，適用于基因全長的克隆和qRTPCR；2、

5、克隆得到的CcARFcDNA全長從起始密碼子atg，到終止密碼子taa共2337個(gè)堿基，編碼778個(gè)氨基酸，CcARF與19種樹種25個(gè)基因同源性比對(duì)，該基因與其他植物ARF基因同源性較高，保守區(qū)域集中在ARF蛋白flOB3DNA結(jié)合域(DBD)。系統(tǒng)進(jìn)化樹表明CcARF與蓖麻基因的親緣關(guān)系最近，葡萄基因次之，與楊樹的親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。3、利用定量RTPCR技術(shù)，對(duì)不同處理(空白對(duì)照，4mg／lIAA，和0399／lNPA)在不同嫁接時(shí)期(

6、Od，ld，3d，5d，7d，14d)山核桃C叫肚基因的表達(dá)進(jìn)行分析。結(jié)果表明：在對(duì)照中，山核杉gCcA髓因的表達(dá)量從嫁接前到嫁接后1d急劇下降，在隨后的2d里，該基因的表達(dá)量在接穗中上升明顯，然后下降。在砧木中，嫁接1d后，該基因表達(dá)量急劇下降，在隨后的6d里表達(dá)量上升明顯。嫁接7d后，Cd腿因的轉(zhuǎn)錄水平達(dá)到最高，然后下降。通過IAA處理山核杉LCcARF基因的表達(dá)量從嫁接前到嫁接后3d急劇下降，在隨后的11d里，該基因的表達(dá)量在接穗