不同啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)Rc基因在轉(zhuǎn)基因水稻中表達(dá)的研究.pdf

1、天然有色米是色素沉淀在水稻種子的種皮中形成的，其中紅米和紫米是我們生活中最常見(jiàn)的兩種。紅米中的色素屬于原花青素（Procyanidins），水稻中的Rc基因參與調(diào)控花青素的合成。普通的栽培稻由于Rc基因中存在14個(gè)堿基的缺失，其稻米呈白色。
　　目前農(nóng)作物育種中應(yīng)用最廣泛、最有效的技術(shù)是雜交育種技術(shù)。但普通的三系雜交容易受細(xì)胞質(zhì)育性的影響，而兩系雜交則易受光、溫的影響，存在一定的不穩(wěn)定性。本研究基于水稻智能不育系的設(shè)計(jì)思路，擬利用

2、控制花青素合成的Rc基因在水稻種子中合成色素作為色選標(biāo)記;為此，克隆了Rc基因，構(gòu)建了由不同啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的Rc融合基因載體，并培育了轉(zhuǎn)基因水稻植株。獲得的主要進(jìn)展與成果如下:
　　1、從大麥基因組中克隆了糊粉層特異性表達(dá)的Chi26啟動(dòng)子，并與GUS報(bào)告基因構(gòu)建成融合基因，研究其在水稻中的表達(dá)特性。在基因組文庫(kù)中搜索Rc基因的全序列，克隆了其全長(zhǎng)編碼區(qū)序列，構(gòu)建了分別由Chi26啟動(dòng)子、水稻谷蛋白Gt1啟動(dòng)子和玉米Ubi啟動(dòng)子指導(dǎo)的

3、Rc融合基因。通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法分別侵染水稻的愈傷組織，經(jīng)過(guò)共培養(yǎng)、潮霉素抗性篩選、預(yù)分化、分化、生根培養(yǎng)等過(guò)程，分別獲得30個(gè)以上的獨(dú)立轉(zhuǎn)化子，經(jīng)分子鑒定表明，其中約86％為陽(yáng)性轉(zhuǎn)基因植株。
　　2、通過(guò)對(duì)GUS活性的定性和定量分析，結(jié)果表明Chi26啟動(dòng)子指導(dǎo)的GUS報(bào)告基因在轉(zhuǎn)基因水稻未開(kāi)花的子房中以及種子的糊粉層中特異性表達(dá)，在莖、葉鞘、花藥、胚乳中均不表達(dá)或表達(dá)量極低。
　　3、利用半定量RT-PCR的方法，證明導(dǎo)入