卵泡抑素對(duì)牛顆粒細(xì)胞調(diào)控機(jī)制的研究.pdf

1、通常認(rèn)為，卵泡抑素(Follistatin，F(xiàn)ST)作為一種活化素結(jié)合蛋白，參與調(diào)節(jié)哺乳動(dòng)物卵泡發(fā)育，但其是否能通過(guò)自分泌作用直接調(diào)節(jié)顆粒細(xì)胞和卵泡的發(fā)育，尚無(wú)文獻(xiàn)報(bào)道。為了研究卵泡抑素對(duì)黃牛顆粒細(xì)胞的調(diào)控作用，本研究構(gòu)建卵泡抑素RNA干擾載體RNAi-ReadypSIREN-RetroQ-ZsGreen，在mRNA和蛋白水平干擾牛顆粒細(xì)胞中卵泡抑素的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)在干擾卵泡抑素表達(dá)后:
　　 (1)流式細(xì)胞儀檢測(cè)黃牛顆粒細(xì)胞的周期

2、發(fā)現(xiàn)，更多的細(xì)胞阻滯在G1期，控制細(xì)胞周期的p21基因蛋白表達(dá)量顯著上調(diào);
　　 (2)流式細(xì)胞儀檢測(cè)顆粒細(xì)胞的凋亡發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞早期和晚期凋亡都顯著增加，通過(guò)RT-PCR和WesternBlot分析凋亡相關(guān)基因的表達(dá)發(fā)現(xiàn)，Caspase-3和BAX的表達(dá)水平顯著上調(diào)，而B(niǎo)cl-2的表達(dá)水平則顯著下調(diào);
　　 (3)ELISA檢測(cè)顆粒細(xì)胞分泌活化素、雌激素和孕激素濃度發(fā)現(xiàn)，活化素分泌顯著上調(diào)，雌激素分泌量顯著下降，而孕激素變

3、化不顯著;
　　 (4)通過(guò)RT-PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染后顆粒細(xì)胞中活化素受體及抑制素各亞基的mRNA水平，發(fā)現(xiàn)所有活化素受體(ACVR1、ACVR2A和ACVR2B)以及抑制素α亞基（INHA）的表達(dá)量都顯著上調(diào)，而抑制素β亞基（INHBA和INHBB）的表達(dá)量沒(méi)有明顯變化。
　　 這些結(jié)果說(shuō)明卵泡抑素是通過(guò)影響顆粒細(xì)胞中抑制素和活化素受體的活動(dòng)，進(jìn)而調(diào)控細(xì)胞周期和凋亡相關(guān)基因的表達(dá)從而調(diào)控細(xì)胞的周期并且抑制細(xì)胞的凋亡，進(jìn)而影