儀器分析課程設計--- 高效液相色譜

1、<p><b>　　高效液相色譜</b></p><p><b>　　摘要</b></p><p>　　高效液相色譜法又稱“高壓液相色譜”“高速液相色譜”“高分離度液相色譜” “近代柱色譜”等。高效液相色譜是色譜法的一個重要分支，以液體為流動相，采用高壓輸液系統(tǒng)。</p><p>　　高效液相色譜用高壓輸液泵將具

2、有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，經(jīng)進樣閥注入待測樣品，由流動相帶入柱內(nèi)，在柱內(nèi)各成分被分離后，依次進入檢測器進行檢測，從而實現(xiàn)對試樣的分析。這種方法已成為化學、生化、醫(yī)學、工業(yè)、農(nóng)業(yè)、環(huán)保、商檢和法檢等學科領域中重要的分離分析技術，是分析化學、生物化學和環(huán)境化學工作者手中必不可少的工具。</p><p>　　關鍵詞： 液相色譜 高效液相色譜 色譜法 流動

3、相</p><p>　　High-performance liquid chromatography</p><p>　　Abstract： High-performance liquid chromatography, also known as "high-pressure liquid chromatography," "high-speed liqui

4、d chromatography," "high-resolution liquid chromatography," "Modern chromatography" and so on. HPLC chromatography is an important branch of the liquid as the mobile phase, high pressure infusion

5、 system. High-performance liquid chromatography with high-pressure infusion pump with a single solvent or a different polarity, different combinations of solvents, buffers and other mob</p><p>　　Key words： L

6、iquid chromatography HPLC Chromatography Mobile phase</p><p><b>　　目錄</b></p><p><b>　　第一章 概述</b></p><p>　　以高壓液體為流動相的液相色譜分析法稱高效液相色譜法（HPLC）。其基本方法是用高壓泵將具有一

7、定極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑泵入裝有填充劑的色譜柱，經(jīng)進樣閥注入的樣品被流動相帶入色譜柱內(nèi)進行分離后依次進入檢測器，由記錄儀、積分儀或數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)記錄色信號或進行數(shù)據(jù)處理而得到分析結(jié)果。</p><p>　　由于高效液相色譜法具有分離效能高、選擇性好、靈敏度高、分析速度快、適用范圍廣（樣品不需氣化，只需制成溶液即可）、色譜柱可反復使用的特點，在《中國藥典》中有50種中成藥的定量分析采用該法，已成為中藥制劑

8、含量測定最常用的分析方法。</p><p>　　高效液相色譜法按固定相不同可分為液-液色譜法和液-固色譜法；按色譜原理不同可分為分配色譜法（液-液色譜）和吸附色譜法（液-固色譜）等。</p><p>　　目前，化學鍵合相色譜應用最為廣泛，它是在液－液色譜法的基礎上發(fā)展起來的。將固定液的官能團鍵合在載體上，形成的固定相稱為化學鍵合相，不易流失是其特點，一般認為有分配與吸附兩種功能，常以分配作

9、用為主。C18（ODS）為最常使用的化學鍵合相。</p><p>　　根據(jù)固定相與流動相極性的不同，液-液色譜法又可分為正相色譜法和反相色譜法，當流動相的極性小于固定相的極性時稱正相色譜法，主要用于極性物質(zhì)的分離分析；當流動相的極性大于固定相的極性時稱反相色譜法，主要用于非極性物質(zhì)或中等極性物質(zhì)的分離分析。</p><p>　　1.1高效液相色譜的發(fā)展歷史</p><p

10、>　　色譜法最早是由俄國植物學家茨維特在1906年研究用碳酸鈣分離植物色素時發(fā)現(xiàn)的，色譜法(Chromatography)因之得名。后來在此基礎上發(fā)展出紙色譜法、薄層色譜法、氣相色譜法、液相色譜法。液相色譜法開始階段是用大直徑的玻璃管柱在室溫和常壓下用液位差輸送流動相，稱為經(jīng)典液相色譜法，此方法柱效低、時間長（常有幾個小時）。高效液相色譜法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)是

11、在經(jīng)典液相色譜法的基礎上，于60年代后期引入了氣相色譜理論而迅速發(fā)展起來的。它與經(jīng)典液相色譜法的區(qū)別是填料顆粒小而均勻，小顆粒具有高柱效，但會引起高阻力，需用高壓輸送流動相，故又稱高壓液相色譜法(High Pressure Liquid Chromatography，HPLC)。又因分析速度快而稱為高速液相色譜法(High Speed Liquid Chromatography，HSLP)。也稱現(xiàn)代液相色譜。</p>&l

12、t;p>　　1906年俄國植物化學家茨維特首次提出“色譜法”和“色譜圖”的概念。他在論文中寫到： “植物色素的石油醚溶液從一根主要裝有碳酸鈣吸附劑的玻璃管上端加入，沿管濾下，后用純石油醚淋洗，結(jié)果按照不同色素的吸附順序在管內(nèi)觀察到它們相應的色帶，就象光譜一樣，稱之為色譜圖?！?lt;/p><p>　　1930年以后，相繼出現(xiàn)了紙色譜、離子交換色譜和薄層色譜等液相色譜技術。</p><p>

13、;　　1952年，英國學者Martin和Synge 基于他們在分配色譜方面的研究工作，提出了關于氣－液分配色譜的比較完整的理論和方法，把色譜技術向前推進了一大步，這是氣相色譜在此后的十多年間發(fā)展十分迅速的原因。</p><p>　　1958年，基于Moore和Stein的工作，離子交換色譜的儀器化導致了氨基酸分析儀的出現(xiàn)，這是近代液相色譜的一個重要嘗試，但分離效率尚不理想。</p><p>

14、;　　1960年中后期，氣相色譜理論和實踐的發(fā)展，以及機械、光學、電子等技術上的進步，液相色譜又開始活躍。到60年代末期把高壓泵和化學鍵合固定相用于液相色譜就出現(xiàn)了HPLC。</p><p>　　1970年中期以后，微處理機技術用于液相色譜，進一步提高了儀器的自動化水平和分析精度。</p><p>　　1990年以后，生物工程和生命科學在國際和國內(nèi)的迅速發(fā)展，為高效液相色譜技術提出了更多、

15、更新的分離、純化、制備的課題，如人類基因組計劃，蛋白質(zhì)組學有HPLC作預分離等。</p><p>　　1.2高效液相色譜特點</p><p>　　高效液相色譜的優(yōu)點是：檢測的分辨率和靈敏度高，分析速度快，重復性好，定量精度高，應用范圍廣。適用于分析高沸點、大分子、強極性、熱穩(wěn)定性差的化合物。其缺點是：價格昂貴，要用各種填料柱，容量小，分析生物大分子和無機離子困難，流動相消耗大且有毒性的居多

16、。</p><p>　?、俑邏海毫鲃酉酁橐后w，流經(jīng)色譜柱時，受到的阻力較大，為了能迅速通過色譜柱，必須對載液加高壓。</p><p>　　②高效：分離效能高?？蛇x擇固定相和流動相以達到最佳分離效果，比工業(yè)精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍。</p><p>　?、鄹哽`敏度：紫外檢測器可達0.01ng，進樣量在uL數(shù)量。</p><p>　　

17、④應用范圍廣：百分之七十以上的有機化合物可用高效液相色譜分析，特別是高沸點、大分子、強極性、熱穩(wěn)定性差化合物的分離分析，顯示出優(yōu)勢。</p><p>　?、莘治鏊俣瓤臁⑤d液流速快：較經(jīng)典液體色譜法速度快得多，通常分析一個樣品在15～30分鐘，有些樣品甚至在5分鐘內(nèi)即可完成，一般小于1小時。</p><p>　　此外高效液相色譜還有色譜柱可反復使用、樣品不被破壞、易回收等優(yōu)點，但也有缺點，與

18、氣相色譜相比各有所長，相互補充。高效液相色譜的缺點是有“柱外效應”。在從進樣到檢測器之間，除了柱子以外的任何死空間（進樣器、柱接頭、連接管和檢測池等）中，如果流動相的流型有變化，被分離物質(zhì)的任何擴散和滯留都會顯著地導致色譜峰的加寬，柱效率降低。高效液相色譜檢測器的靈敏度不及氣相色譜。</p><p>　　1.3高效液相色譜的基本概念和術語</p><p><b>　　1．色譜圖和

19、峰參數(shù)</b></p><p>　　色譜圖(chromatogram)——樣品流經(jīng)色譜柱和檢測器，所得到的信號-時間曲線，又稱色譜流出曲線(elution profile)。</p><p>　　基線(base line)——經(jīng)流動相沖洗，柱與流動相達到平衡后，檢測器測出一段時間的流出曲線。一般應平行于時間軸。</p><p>　　噪音(noise)——

20、基線信號的波動。通常因電源接觸不良或瞬時過載、檢測器不穩(wěn)定、流動相含有氣泡或色譜柱被污染所致。</p><p>　　漂移(drift)——基線隨時間的緩緩變化。主要由于操作條件如電壓、溫度、流動相及流量的不穩(wěn)定所引起，柱內(nèi)的污染物或固定相不斷被洗脫下來也會產(chǎn)生漂移。</p><p>　　色譜峰(peak)——組分流經(jīng)檢測器時響應的連續(xù)信號產(chǎn)生的曲線。流出曲線上的突起部分。正常色譜峰近似于對

21、稱形正態(tài)分布曲線（高斯Gauss曲線）。不對稱色譜峰有兩種：前延峰(leading peak)和拖尾峰(tailing peak)。前者少見。拖尾因子(tailing factor，T)——用以衡量色譜峰的對稱性。也稱為對稱因子(symmetry factor)或不對稱因子(asymmetry factor)。峰底—基線上峰的起點至終點的距離。</p><p>　　峰高(peak height，h)—峰的最高點

22、至峰底的距離。</p><p>　　峰寬（peak width，W)—峰兩側(cè)拐點處所作兩條切線與基線的兩個交點間的距離。W＝4σ</p><p>　　半峰寬（peak width at half-height，Wh/2)—峰高一半處的峰寬。Wh/2＝2.355σ</p><p>　　標準偏差（standard deviation，σ)—正態(tài)分布曲線x＝±1

23、時（拐點）的峰寬之半。正常峰的拐點在峰高的0.607倍處。標準偏差的大小說明組分在流出色譜柱過程中的分散程度。σ小，分散程度小、極點濃度高、峰形瘦、柱效高；反之，σ大，峰形胖、柱效低。</p><p>　　峰面積(peak area，A)—峰與峰底所包圍的面積。A＝×σ×h＝2.507σh＝1.064 Wh/2h</p><p>　　2．定性參數(shù)（保留值）</p&

24、gt;<p>　　死時間(dead time，t0)——不保留組分的保留時間。即流動相（溶劑）通過色譜柱的時間。在反相HPLC中可用苯磺酸鈉來測定死時間。</p><p>　　死體積(dead volume，V0)——由進樣器進樣口到檢測器流動池未被固定相所占據(jù)的空間。它包括4部分：進樣器至色譜柱管路體積、柱內(nèi)固定相顆粒間隙（被流動相占據(jù)，Vm）、柱出口管路體積、檢測器流動池體積。其中只有Vm參與色

25、譜平衡過程，其它3部分只起峰擴展作用。為防止峰擴展，這3部分體積應盡量減小。V0＝F×t0（F為流速）</p><p>　　保留時間(retention time，tR)——從進樣開始到某個組分在柱后出現(xiàn)濃度極大值的時間。</p><p>　　保留體積(retention volume，VR)——從進樣開始到某組分在柱后出現(xiàn)濃度極大值時流出溶劑的體積。又稱洗脫體積。VR＝F

26、15;tR</p><p>　　調(diào)整保留時間(adjusted retention time，t'R)——扣除死時間后的保留時間。也稱折合保留時間(reduced retention time)。在實驗條件（溫度、固定相等）一定時，t'R只決定于組分的性質(zhì)，因此，t'R（或tR）可用于定性。t'R＝tR－t0</p><p><b>　　3．柱效參

27、數(shù)</b></p><p>　　理論塔板數(shù)(theoretical plate number，N)——用于定量表示色譜柱的分離效率（簡稱柱效）。</p><p>　　N取決于固定相的種類、性質(zhì)（粒度、粒徑分布等）、填充狀況、柱長、流動相的種類和流速及測定柱效所用物質(zhì)的性質(zhì)。</p><p>　　N為常量時，W隨tR成正比例變化。在一張多組分色譜圖上，如果

28、各組分含量相當，則后洗脫的峰比前面的峰要逐漸加寬，峰高則逐漸降低。</p><p>　　用半峰寬計算理論塔數(shù)比用峰寬計算更為方便和常用，因為半峰寬更易準確測定，尤其是對稍有拖尾的峰。</p><p>　　N與柱長成正比，柱越長，N越大。用N表示柱效時應注明柱長，如果未注明，則表示柱長為1米時的理論塔板數(shù)。（一般HPLC柱的N在1000以上。）</p><p>　　理

29、論塔板高度(theoretical plate height，H)——每單位柱長的方差。</p><p><b>　　4．相平衡參數(shù)</b></p><p>　　分配系數(shù)(distribution coefficient，K)——在一定溫度下，化合物在兩相間達到分配平衡時，在固定相與流動相中的濃度之比。</p><p>　　分配系數(shù)與組分、流動

30、相和固定相的熱力學性質(zhì)有關，也與溫度、壓力有關。在不同的色譜分離機制中，K有不同的概念：吸附色譜法為吸附系數(shù)，離子交換色譜法為選擇性系數(shù)(或稱交換系數(shù))，凝膠色譜法為滲透參數(shù)。但一般情況可用分配系數(shù)來表示。</p><p>　　在條件(流動相、固定相、溫度和壓力等)一定，樣品濃度很低時(Cs、Cm很小)時，K只取決于組分的性質(zhì)，而與濃度無關。這只是理想狀態(tài)下的色譜條件，在這種條件下，得到的色譜峰為正常峰；在許多情

31、況下，隨著濃度的增大，K減小，這時色譜峰為拖尾峰；而有時隨著溶質(zhì)濃度增大，K也增大，這時色譜峰為前延峰。因此，只有盡可能減少進樣量，使組分在柱內(nèi)濃度降低，K恒定時，才能獲得正常峰。</p><p>　　在同一色譜條件下，樣品中K值大的組分在固定相中滯留時間長，后流出色譜柱；K值小的組分則滯留時間短，先流出色譜柱?；旌衔镏懈鹘M分的分配系數(shù)相差越大，越容易分離，因此混合物中各組分的分配系數(shù)不同是色譜分離的前提。<

32、;/p><p>　　在HPLC中，固定相確定后，K主要受流動相的性質(zhì)影響。實踐中主要靠調(diào)整流動相的組成配比及pH值，以獲得組分間的分配系數(shù)差異及適宜的保留時間，達到分離的目的。</p><p>　　容量因子(capacity factor，k)——化合物在兩相間達到分配平衡時，在固定相與流動相中的量之比。</p><p>　　選擇性因子(selectivity fact

33、or，α)——相鄰兩組分的分配系數(shù)或容量因子之比。</p><p>　　要使兩組分得到分離，必須使α≠1。α與化合物在固定相和流動相中的分配性質(zhì)、柱溫有關，與柱尺寸、流速、填充情況無關。從本質(zhì)上來說，α的大小表示兩組分在兩相間的平衡分配熱力學性質(zhì)的差異，即分子間相互作用力的差異。</p><p><b>　　5．分離參數(shù)</b></p><p>

34、;　　分離度(resolution，R)——相鄰兩峰的保留時間之差與平均峰寬的比值。也叫分辨率，表示相鄰兩峰的分離程度。R＝。當W1＝W2時，R＝。當R＝1時，稱為4σ分離，兩峰基本分離，裸露峰面積為95.4%，內(nèi)側(cè)峰基重疊約2%。R＝1.5時，稱為6σ分離，裸露峰面積為99.7%。R≥1.5稱為完全分離。</p><p>　　從基本分離方程可看出，提高分離度有三種途徑：①增加塔板數(shù)。方法之一是增加柱長，但這樣會

35、延長保留時間、增加柱壓。更好的方法是降低塔板高度，提高柱效。②增加選擇性。當α＝1時，R＝0，無論柱效有多高，組分也不可能分離。一般可以采取以下措施來改變選擇性：a. 改變流動相的組成及pH值；b. 改變柱溫；c. 改變固定相。③改變?nèi)萘恳蜃?。這常常是提高分離度的最容易方法，可以通過調(diào)節(jié)流動相的組成來實現(xiàn)。k2趨于0時，R也趨于0；k2增大，R也增大。但k2不能太大，否則不但分離時間延長，而且峰形變寬，會影響分離度和檢測靈敏度。一般k2

36、在1~10范圍內(nèi)，最好為2~5，窄徑柱可更小些。</p><p>　　第二章 高效液相色譜基本理論</p><p>　　2.1高效液相色譜的分類</p><p>　　根據(jù)分離原理的不同，可分為：</p><p>　?。ㄒ唬┮海悍峙渖V法</p><p>　　流動相和固定相都是液體。試樣溶于流動相后，在色譜柱內(nèi)經(jīng)過分界

37、面進入固定液（固定相）中，由于試樣組分在固定相和流動相之間的相對溶解度存在差異，因而溶質(zhì)在兩相間進行分配。跟氣一液分配色譜有相似之處：分離順序決定于分配系數(shù)的大小，分配系數(shù)大的組分保留值大。分配系數(shù)為溶質(zhì)在固定相和流動相中的濃度之比。但是氣相色譜法中流動相的性質(zhì)對分配系數(shù)影響大小，而液相色譜中流動相的種類對分配系數(shù)卻有較大的影響。</p><p><b>　?。ǘ┪缴V法</b><

38、/p><p>　　流動相為液體，固定相為吸附劑。這是根據(jù)物質(zhì)吸附作用的不同來進行分離的。溶質(zhì)分子被固定相吸附，將取代固定相表面上的溶劑分子。如果溶劑分子吸附性更強，則被吸附的溶質(zhì)分子將相應地減少。吸附性大的溶質(zhì)就會最后流出。</p><p>　　液一固色譜適用于分離相對分子質(zhì)量中等的油溶性樣品，對具有不同官能團的化合物和異構(gòu)體有較高的選擇性。凡能用薄層色譜成功地進行分離的化合物，亦可用液一固色

39、譜進行分離。缺點是由于非線性等溫吸附常引起峰的拖尾現(xiàn)象。</p><p>　　（三）離子交換色譜法</p><p>　　離子交換色譜法是基于離子交換樹脂上可電離的離子與流動相中具有相同電荷的溶質(zhì)離子進行可逆交換，依據(jù)這些離子對交換劑具有不同的親和力而將它們分離的一種方法。</p><p>　　離子交換色譜主要用來分離離子或可離解的化合物，它不僅用于無機離子的分離，例

40、如稀土化合物及各種裂變產(chǎn)物，還用于有機物的分離。20世紀60年代前后，已成功地分離了氨基酸、 核酸、蛋白質(zhì)等，在生物化學領域得到了廣泛的應用。</p><p><b>　　〔四）離子對色譜法</b></p><p>　　離子對色譜法是將一種（或多種）與溶劑分子電荷相反的離子（稱為對離子或反離子）加到流動相或固定相中，使其與溶質(zhì)離子結(jié)合形成離子對化合物，從而控制溶質(zhì)離子

41、的保留行為。</p><p>　　離子對色譜，特別是反相離子對色譜解決了以往難分離混合物的分離問題，諸如酸、堿和離子和非離子的混合物，特別對一些生化樣品如核酸、核苷、兒茶酚胺、生物堿以及藥物等的分離。另外還可以借助離子對的生成給樣品引入紫外吸收或發(fā)熒光的基團，以提高檢測的靈敏度。</p><p><b>　?。ㄎ澹╇x子色譜法</b></p><p&

42、gt;　　離子色譜是目前唯一能獲得快速、靈敏、準確和多組分分析效果的方法，因而受廣泛重視并得到迅速的發(fā)展。檢測手段已擴展到電導檢測器之外的其它類型的檢測器，如電化學檢測器，紫外光度檢測器等。可分析的離子正在增多，從無機和有機陰離子至金屬陽離子，從有機陽離子到糖類、氨基酸等均可用離子色譜法進行分析。</p><p><b>　　（六）空間排阻色譜</b></p><p>

43、;　　空間排阻色譜以凝膠為固定相，它的分離機理與其它色譜完全不同。它類似于分子篩的作用，但凝膠的孔徑比分子篩要大得多，一般為數(shù)納米到數(shù)百納米。溶質(zhì)在兩相之間不是靠其相互作用力的不同來分離，而是按分子大小進行分離。分離只與凝膠的孔徑分布和溶質(zhì)的流體力學體積或分子大小有關。</p><p>　　2.2流程與結(jié)構(gòu)組成</p><p><b>　　2.2.1流程</b><

44、;/p><p><b>　　流程</b></p><p>　　流程：如上圖所示，溶劑貯器（1）中的流動相被泵（2）吸入，經(jīng)〔3〕梯度控制器按一寫的梯度進行混后然后輸出，經(jīng)（4）測其壓力和流量，導入（5進樣閥（器）經(jīng)（6）保護柱、（7）分離柱后到（8）檢測器檢測，由（10）數(shù)據(jù)處理設備處理數(shù)據(jù)或（11）記錄儀記錄色譜圖，（12）餾分收集器收集餾分，（13）為廢液。 <

45、/p><p><b>　　2.2.2結(jié)構(gòu)組成</b></p><p>　　高效液相色譜儀可分為以下幾個部分：</p><p><b>　　1.高壓輸液泵：</b></p><p>　　（1）功能：驅(qū)動流動相和樣品通過色譜分離柱和檢測系統(tǒng)；</p><p>　　（2）性能要求：流量

46、穩(wěn)定（±1?），耐高壓（30－60Mpa），耐各種流動相：例如：有機溶劑、水和緩沖液；</p><p>　?。?）種類：往復泵和隔膜泵。</p><p><b>　　2.色譜柱</b></p><p>　?。?）功能：分離樣品中的各個物質(zhì)；</p><p>　?。?）尺寸：10～30cm長，2～5mm內(nèi)經(jīng)的內(nèi)壁

47、拋光的不銹鋼管柱；</p><p>　?。?）填料粒度：5～10µm，高效微粒固定相；</p><p><b>　　3.進樣器</b></p><p>　?。?）功能：將待分析樣品引入色譜系統(tǒng)；</p><p>　?。?）種類：①注射器，10Mpa以下，1～10µl微量注射器進樣；②停流進樣；③閥進樣

48、，常用、較</p><p>　　理想、體積可變，可固定；④自動進樣器，有利于重復操作，實現(xiàn)自動化。</p><p><b>　　4.檢測器</b></p><p>　?。?）功能：將被分析組在柱流出液中濃度的變化轉(zhuǎn)化為光學或電學信號；（2）分類：①示差折光化學檢測器</p><p><b>　?、谧贤馕諜z測

49、器 </b></p><p>　?、圩贤庖豢赏止夤舛葯z測器</p><p>　?、芏O管陣列紫外檢測器</p><p><b>　?、轃晒鈾z測器</b></p><p><b>　?、揠娀瘜W檢測器</b></p><p><b>　　5.餾分收集器&l

50、t;/b></p><p>　?。?）功能：如果所進行的色譜分離不是為了純粹的色譜分析，而是為了做其它波譜鑒定，或獲取少量試驗樣品的小型制備，餾分收集是必要的；</p><p>　?。?）方法：①手工，少數(shù)幾個餾分，手續(xù)麻煩，易出差錯。②餾分收集器收集，比較理想，微機控制操作準確。</p><p>　　6.數(shù)據(jù)獲取和處理系統(tǒng)</p><p&

51、gt;　　功能：把檢測器檢測到的信號顯示出來。</p><p><b>　　2.3使用方法</b></p><p><b>　　2.3.1綜述</b></p><p>　　色譜柱的填料和流動相的組分應按各品種項下的規(guī)定.常用的色譜柱填料有硅膠和化學鍵合硅膠。后者以十八烷基硅烷鍵合硅膠最為常用,辛基鍵合硅膠次之,氰基或氨基鍵

52、合硅膠也有使用；離子交換填料,用于離子交換色譜；凝膠或玻璃微球等，用于分子排阻色譜等。注樣量一般為數(shù)微升。除另有規(guī)定外，柱溫為室溫，檢測器為紫外吸收檢測器。 </p><p>　　在用紫外吸收檢測器時,所用流動相應符合紫外分光光度法項下對溶劑的要求。 </p><p>　　1.正文中各品種項下規(guī)定的條件除固定相種類、流動相組分、檢測器類型不得任意改變外，其余如色譜柱內(nèi)徑、長度、固定相牌號、

53、載體粒度、流動相流速、混合流動相各組分的比例、柱溫、進樣量、檢測器的靈敏度等，均可適當改變,以適應具體品種并達到系統(tǒng)適用性試驗的要求。一般色譜圖約于20分鐘內(nèi)記錄完畢。 </p><p>　　2.系統(tǒng)適用性試驗。按各品種項下要求對儀器進行適用性試驗，即用規(guī)定的對照品對儀器進行試驗和調(diào)整,應達到規(guī)定的要求；或規(guī)定分析狀態(tài)下色譜柱的最小理論板數(shù)、分離度和拖尾因子。 </p><p>　　2.3

54、.2色譜柱的理論板數(shù)</p><p>　　在選定的條件下，注入供試品溶液或各品種項下規(guī)定的內(nèi)標物質(zhì)溶液，記錄色譜圖，量出供試品主成分或內(nèi)標物質(zhì)峰的保留時間t(R)和半高峰寬W(h/2)，按n＝5.54[t(R)╱W(h/2)]^2計算色譜柱的理論板數(shù)，如果測得理論板數(shù)低于各品種項下規(guī)定的最小理論板數(shù)，應改變色譜柱的某些條件（如柱長、載體性能、色譜柱充填的優(yōu)劣等），使理論板數(shù)達到要求。 </p>&l

55、t;p><b>　　2.3.3分離度</b></p><p>　　定量分析時，為便于準確測量，要求定量峰與其他峰或內(nèi)標峰之間有較好的分離度。分離度（R）的計算公式為：　2[t(R2)-t(R1)] ，R＝ -W1＋W2 式中 t(R2)為相鄰兩峰中后一峰的保留時間； t(R1)為相鄰兩峰中前一峰的保留時間； W1及W2為此相鄰兩峰的峰寬。 除另外有規(guī)定外，分離度應大于1.5。</

56、p><p><b>　　2.3.4拖尾因子</b></p><p>　　為保證測量精度，特別當采用峰高法測量時，應檢查待測峰的拖尾因子(T)是否符合各品種項下的規(guī)定,或不同濃度進樣的校正因子誤差是否符合要求。拖尾因子計算公式為： </p><p>　　W(0.05h) T＝-2d1 式中 W(0.05h)為0.05峰高處的峰寬； </p>

57、;<p>　　d1為峰極大至峰前沿之間的距離。 除另有規(guī)定外，T應在0.95～1.05間。</p><p>　　也可按各品種校正因子測定項下，配制相當于80％、100％和120％的對照品溶液，加入規(guī)定量的內(nèi)標溶液，配成三種不同濃度的溶液，分別注樣3次,計算平均校正因子，其相對標準偏差應不大于2.0％。 </p><p><b>　　2.4 測定方法</b>

58、;</p><p>　　定量測定時，可根據(jù)樣品的具體情況采用峰面積法或峰高法。但用歸一法或內(nèi)標法測定雜質(zhì)總量時，須采用峰面積法。 </p><p>　　2.4.1面積歸一化法</p><p>　　測定供試品（或經(jīng)衍生化處理的供試品）中各雜質(zhì)及雜質(zhì)的總量限度采用不加校正因子的峰面積歸一法。計算各雜質(zhì)峰面積及其總和，并求出占總峰面積的百分率。但溶劑峰不計算在內(nèi)。色譜圖的

59、記錄時間應根據(jù)各品種所含雜質(zhì)的保留時間決定，除另有規(guī)定外,可為該品種項下主成分保留時間的倍數(shù)。 </p><p>　　2.4.2主成分自身對照法</p><p>　　當雜質(zhì)峰面積與成分峰面積相差懸殊時，采用主成分自身對照法。在測定前，先按各品種項下規(guī)定的雜質(zhì)限度，將供試品稀釋成一定濃度的溶液作為對照溶液，進樣，調(diào)節(jié)檢測器的靈敏度或進樣量，使對照溶液中的主成分色譜峰面積滿足準確測量要求。然后

60、取供試品溶液，進樣，記錄時間，除另有規(guī)定外，應為主成分保留時間的倍數(shù)。根據(jù)測得的供試品溶液的各雜質(zhì)峰面積及其總和并和對照溶液主成分的峰面積比較，計算雜質(zhì)限度。 </p><p><b>　　2.4.3內(nèi)標法</b></p><p>　　測定供試品中雜質(zhì)的總量限度 </p><p>　　采用不加校正因子的峰面積法。取供試品，按各品種項下規(guī)定的方法

61、配制不含內(nèi)標物質(zhì)的供試品溶液，注入儀器，記錄色譜圖Ｉ；再配制含有內(nèi)標物質(zhì)的供試品溶液，在同樣的條件下注樣，記錄色譜圖Ⅱ。記錄的時間除另有規(guī)定外，應為該品種項下規(guī)定的內(nèi)標峰保留時間的倍數(shù)，色譜圖上內(nèi)標峰高應為記錄儀滿標度的30％以上，否則應調(diào)整注樣量或檢測器靈敏度。 </p><p>　　如果色譜圖Ⅰ中沒有與色譜圖Ⅱ上內(nèi)標峰保留時間相同的雜質(zhì)峰，則色譜圖Ⅱ中各雜質(zhì)峰面積之和應小于內(nèi)標物質(zhì)峰面積（溶劑峰不計在內(nèi)）。如

62、果色譜圖Ⅰ中有與色譜圖Ⅱ上內(nèi)標物質(zhì)峰保留時間相同的雜質(zhì)峰，應將色譜圖Ⅱ上的內(nèi)標物質(zhì)峰面積減去色譜圖Ⅰ中此雜質(zhì)峰面積，即為內(nèi)標物質(zhì)峰的校正面積；色譜圖Ⅱ中各雜質(zhì)峰總面積加色譜圖Ⅰ中此雜峰面積，即為各雜質(zhì)峰的校正總面積，各雜質(zhì)峰的校正總面積應小于內(nèi)標物質(zhì)峰的校正面積。 </p><p>　　加校正因子測定供試品中某個雜質(zhì)或主成分含量 </p><p>　　按各品種項下的規(guī)定,精密稱（量）取對照

63、品和內(nèi)標物質(zhì)，分別配成溶液，精密量取各溶液，配成校正因子測定用的對照溶液，取一定量注入儀器，記錄色譜圖，測量對照品和內(nèi)標物質(zhì)的峰面積或峰高，按下式計算校正因子： </p><p>　　As／ms]校正因子f＝- Ar／mr 式中 As為內(nèi)標物質(zhì)的峰面積或峰高，Ar為對照品的峰面積或峰高； ms為加入內(nèi)標物質(zhì)的量,mr為加入對照品的量。 再取各品種項下含有內(nèi)標物質(zhì)的供試品溶液，注入儀器，記錄色譜圖，測量供試品（或其

64、雜質(zhì)）峰和內(nèi)標物質(zhì)的峰面積或峰高，按下式計算含量：Ax 含量（mx）＝f×-As／ms 式中 Ax為供試品（或其雜質(zhì)）峰面積或峰高； mx為供試品（或其雜質(zhì)）的量。 f、As和ms的意義同上。 </p><p>　　當配制校正因子測定用的對照溶液和含有內(nèi)標物質(zhì)的供試品溶液使用同一份內(nèi)標物質(zhì)溶液時，則配制內(nèi)標物質(zhì)溶液不必精密稱（量）取。 </p><p><b>　　2.

65、4.4外標法</b></p><p>　　測定供試品中某個雜質(zhì)或主成分含量 </p><p>　　按各品種項下的規(guī)定,精密稱(量)取對照品和供試品，配制成溶液，分別精密取一定量，注入儀器，記錄色譜圖，測量對照品和供試品待測成分的峰面積（或峰高），按下式計算含量： </p><p>　　A<[x]> 含量（mx）＝mr×-Ar式中各符

66、號意義同上 </p><p>　　由于微量注射器不易精確控制進樣量，當采用外標法測定供試品中某雜質(zhì)或主成分含量時，以定量環(huán)進樣為好。 </p><p><b>　　2.5設備選型</b></p><p><b>　　2.5.1綜述</b></p><p>　　要正確地選擇色譜分離方法，首先必須盡可能

67、多的 了解樣品的有關性質(zhì)，其次必須熟悉各種色譜方法的主要特點及其應用范圍。選擇色譜分離方法的主要根據(jù)是樣品的相對分子質(zhì)量的大小，在水中和有機溶劑中的溶解度，極性和穩(wěn)定程度以及化學結(jié)構(gòu)等物理、化學性質(zhì)。 </p><p>　　2.5.2相對分子質(zhì)量</p><p>　　對于相對分子質(zhì)量較低（一般在200以下），揮發(fā)性比較好，加熱又不易分解的樣品，可以選擇氣相色譜法進行分析。相對分子質(zhì)量在20

68、0 ~ 2000的化合物，可用液固吸附、液-液分配和離子交換色譜法。相對分子質(zhì)量高于2000，則可用空間排阻色譜法。 </p><p><b>　　2.5.3溶解度</b></p><p>　　水溶性樣品最好用離子交換色譜法和液液分配色譜法；微溶于水，但在酸或堿存在下能很好電離的化合物，也可用離子交換色譜法；油溶性樣品或相對非極性的混合物，可用液-固色譜法。 <

69、/p><p><b>　　2.5.4化學結(jié)構(gòu)</b></p><p>　　若樣品中包含離子型或可離子化的化合物，或者能與離子型化合物相互作用的化合物（例如配位體及有機螯合劑），可首先考慮用離子交換色譜，但空間排阻和液液分配色譜也都能順利地應用于離子化合物；異構(gòu)體的分離可用液固色譜法；具有不同官能團的化合物、同系物可用液液分配色譜法；對于高分子聚合物，可用空間排阻色譜法。

70、</p><p>　　第三章 高效液相色譜儀</p><p>　　HPLC的出現(xiàn)不過三十多年的時間，但這種分離分析技術的發(fā)展十分迅猛，目前應用也十分廣泛。其儀器結(jié)構(gòu)和流程也多種多樣。典型的高效液相色譜儀結(jié)構(gòu)和流程可用下列方框圖表示（See Fig.3-4）。高效液相色譜儀一般都具備貯液器、高壓泵、梯度洗提裝置（用雙泵）、進樣器、色譜柱、檢測器、恒溫器、記錄儀等主要部件。</p>

71、<p>　　高效液相色譜更適宜于分離、分析高沸點、熱穩(wěn)定性差、有生理活性及相對分子量比較大的物質(zhì)，因而廣泛應用于核酸、肽類、內(nèi)酯、稠環(huán)芳烴、高聚物、藥物、人體代謝產(chǎn)物、表面活性劑，抗氧化劑、殺蟲劑、除莠劑的分析等物質(zhì)的分析。 </p><p><b>　　3.1高壓泵</b></p><p>　　HPLC使用的色譜柱是很細的（1~6 mm），所用固定相的

72、粒度也非常?。◣爪蘭到幾十μm），所以流動相在柱中流動受到的阻力很大，在常壓下，流動相流速十分緩慢，柱效低且費時。為了達到快速、高效分離，必須給流動相施加很大的壓力，以加快其在柱中的流動速度。為此，須用高壓泵進行高壓輸液。高壓、高速是高效液相色譜的特點之一。</p><p>　　HPLC使用的高壓泵應滿足下列條件：</p><p>　　a. 流量恒定，無脈動，并有較大的調(diào)節(jié)范圍（一般為1~

73、10 mL/min）；</p><p>　　b. 能抗溶劑腐蝕；</p><p>　　c. 有較高的輸液壓力；對一般分離，60×105Pa的壓力就滿足了，對高效分離，要求達到150~300×105Pa。</p><p>　　(1). 往復式柱塞泵</p><p>　　當柱塞推入缸體時，泵頭出口（上部）的單向閥打開，同時，流

74、動相進入的單向閥（下部）關閉，這時就輸出少量的流體。反之，當柱塞向外拉時，流動相入口的單向閥打開，出口的單向閥同時關閉，一定量的流動相就由其儲液器吸入缸體中。這種泵的特點是不受整個色譜體系中其余部分阻力稍有變化的影響，連續(xù)供給恒定體積的流動相。</p><p><b>　?。?）氣動放大泵</b></p><p>　　其工作原理是：壓力為 p1 的低壓氣體推動大面積（

75、 SA ）活塞 A ，則在小面積（ SB ）活塞 B 輸出壓力增大至 p2 的液體。壓力增大的倍數(shù)取決于 A 和 B 兩活塞的面積比，如果 A 與 B 的面積之比為 50 : 1 ，則壓力為 5 × Pa 的氣體就可得到壓力為 250×Pa 的輸出液體。這是一種恒壓泵。</p><p><b>　　3.2梯度洗提</b></p><p>　　類似于

76、GC中的程序升溫。已成為現(xiàn)代高效液相色譜中部缺少的部分。</p><p>　　梯度洗提，就是載液中含有兩種（或更多）不同極性的溶劑，在分離過程中按一定的程序連續(xù)改變載液中溶劑的配比和極性，通過載液中極性的變化來改變被分離組分的分離因素，以提高分離效果。梯度洗提可以分為兩種： </p><p>　　a. 低壓梯度（也叫外梯度）：在常壓下，預先按一定程序?qū)煞N或多種不同極性的溶劑混合后，再用一

77、臺高壓泵輸入色譜柱。 </p><p>　　b.高壓梯度 ( 或稱內(nèi)梯度系統(tǒng) ) ：利用兩臺高壓輸液泵，將兩種不同極性的溶劑按設定的比例送入梯度混合室，混合后，進入色譜柱。 </p><p><b>　　3.3進樣裝置</b></p><p>　　(1).注射器進樣裝置：進樣所用微量注射器及進樣方式與 GC法一樣。進樣壓力150×10

78、5Pa時，必須采用停流進樣。</p><p>　　(2).高壓定量進樣閥：與GC法用的流通法相似，能在高壓下進樣。</p><p><b>　　3.4色譜柱</b></p><p>　　色譜柱是色譜儀最重要的部件（心臟）。通常用后壁玻璃管或內(nèi)壁拋光的不銹鋼管制作的，對于一些有腐蝕性的樣品且要求耐高壓時，可用銅管、鋁管或聚四氟乙烯管。柱子內(nèi)徑一般

79、為1～6 mm。常用的標準柱型是內(nèi)徑為 4.6 或 3.9mm ，長度為 15 ～ 30cm 的直形不銹鋼柱。填料顆粒度 5 ～ 10μm ，柱效以理論塔板數(shù)計大約 7000 ～ 10000 。 </p><p>　　發(fā)展趨勢是減小填料粒度和柱徑以提高柱效。 </p><p><b>　　3.5檢測器</b></p><p>　　(1).紫外光

80、度檢測器 </p><p>　　它的作用原理是基于被分析試樣組分對特定波長紫外光的選擇性吸收，組分濃度與吸光度的關系遵守比爾定律。最常用的檢測器，應用最廣，對大部分有機化合物有響應。</p><p><b>　　特點： </b></p><p>　　a. 靈敏度高：其最小檢測量10-9g·mL-1，故即使對紫外光吸收很弱的物質(zhì)，也可以

81、檢測； </p><p>　　b. 線性范圍寬；(比爾定律) </p><p>　　c. 流通池可做的很?。?mm × 10mm ，容積 8μL）； </p><p>　　d. 對流動相的流速和溫度變化不敏感,可用于梯度洗脫； </p><p>　　e. 波長可選，易于操作:如，使用裝有流通池的可見紫外分光光度計（可變波長檢測器）。

82、</p><p>　　缺點：對紫外光完全不吸收的試樣不能檢測；同時溶劑的選擇受到限制。 </p><p>　　(2).光電二極管陣列檢測器 </p><p>　　紫外檢測器的重要進展；陣列由1024個光電二極管陣列，每個光電二極管寬僅50μm，各檢測一窄段波長。如圖所示，在檢測器中，光源發(fā)出的紫外或可見光通過液相色譜流通池，在此流動相中的各個組分進行特征吸收，然后通

83、過狹縫，進入單色其進行分光，最后由光電二極管陣列檢測，得到各個組分的吸收信號。經(jīng)計算機快速處理，得三維立體譜圖。 </p><p>　　(3).熒光檢測器 </p><p>　　熒光檢測器是一種高靈敏度、高選擇性檢測器。 </p><p>　　對多環(huán)芳烴，維生素B、黃曲霉素、卟啉類化合物、農(nóng)藥、藥物、氨基酸、甾類化合物等有響應。 </p><p&

84、gt;　　熒光檢測器的結(jié)構(gòu)及工作原理和熒光光度計相似。 </p><p>　　(4).差示折光檢測器　 </p><p>　　除紫外檢測器之外應用最多的檢測器。 </p><p>　　差示折光檢測器是借連續(xù)測定流通池中溶液折射率的方法來測定試樣濃度的檢測器。溶液的折射率是純?nèi)軇鲃酉啵┖图內(nèi)苜|(zhì)（試樣）折射率乘以各物質(zhì)的濃度之和。因此溶有試樣的流動相和純流動相之間折

85、射率之差表示試樣在流動相中的濃度。 </p><p>　　(5).電導檢測器 </p><p>　　其作用原理是根據(jù)物質(zhì)在某些介質(zhì)中電離后所產(chǎn)生電導變化來測定電離物質(zhì)含量。</p><p>　　第四章 高效液相色譜儀操作注意事項</p><p><b>　　4.1操作注意事項</b></p><p&g

86、t;<b>　　4.1.1流動相</b></p><p>　　1、流動相應選用色譜純試劑、高純水或雙蒸水，酸堿液及緩沖液需經(jīng)過濾后使用，過濾時注意區(qū)分水系膜和油系膜的使用范圍；</p><p>　　2、水相流動相需經(jīng)常更換（一般不超過2天），防止長菌變質(zhì)；</p><p>　　3、使用雙泵時，A、B、C、D四相中，若所用流動相中有含鹽流動相，則

87、A、D（進液口位于混合器下方）放置含鹽流動相，B、C（進液口位于混合器上方）放置不含鹽流動相；</p><p>　　A、B、C、D四個儲液器中其中一個為棕色瓶，用于存放水相流動相。</p><p><b>　　4.1.2樣品</b></p><p>　　1、采用過濾或離心方法處理樣品，確保樣品中不含固體顆粒；</p><p&

88、gt;　　2、用流動相或比流動相弱（若為反相柱，則極性比流動相大；若為正相柱，則極性比流動相?。┑娜軇┲苽錁悠啡芤?，盡量用流動相制備樣品液；</p><p>　　手動進樣時，進樣量盡量小，使用定量管定量時，進樣體積應為定量管的3～5倍；</p><p><b>　　4.1.3色譜柱</b></p><p>　　1、使用前仔細閱讀色譜柱附帶的說明

89、書，注意適用范圍，如pH值范圍、流動相類型等；</p><p>　　2、使用符合要求的流動相；</p><p><b>　　3、使用保護柱；</b></p><p>　　4、如所用流動相為含鹽流動相，反相色譜柱使用后，先用水或低濃度甲醇水（如5％甲醇水溶液），再用甲醇沖洗。</p><p>　　5、 色譜柱在不使用時，應

90、用甲醇沖洗，取下后緊密封閉兩端保存；</p><p>　　6、 不要高壓沖洗柱子；</p><p>　　7、 不要在高溫下長時間使用硅膠鍵合相色譜柱；</p><p>　　使用過程中注意輕拿輕放。</p><p><b>　　4.2操作過程</b></p><p><b>　　1、開機操

91、作：</b></p><p>　?。?）打開電源，用Harb相連接時，注意Harb電源，打開計算機，打開Bootp Server；</p><p>　?。?）自上而下打開個組件電源，Bootp Server里顯示有信號時（有六行字符），打開工作站（先打開On line）；</p><p>　?。?）打開沖洗泵頭的10％異丙醇溶液的開關（需用針捅抽），控制

92、流量大小，以能流出的最小流量為準；</p><p>　　（4）注意各流動相所剩溶液的容積設定，若設定的容積低于最低限會自動停泵，注意洗泵溶液的體積，及時加液；</p><p>　?。?）使用過程中要經(jīng)常觀察儀器工作狀態(tài)，及時正確處理各種突發(fā)事件。</p><p>　　2、先以所用流動相沖洗系統(tǒng)一定時間（如所用流動相為含鹽流動相，必須先用水沖洗20分鐘以上再換上含鹽流

93、動相），正式進樣分析前30min 左右開啟D燈或W燈，以延長燈的使用壽命；</p><p>　　3、建立色譜操作方法，注意保存為自己命名的Method，勿覆蓋或刪除他人的方法及實驗結(jié)果；</p><p>　　4、使用手動進樣器進樣時，在進樣前和進樣后都需用洗針液洗凈進樣針筒，洗針液一般選擇與樣品液一致的溶劑，進樣前必須用樣品液清洗進樣針筒3遍以上，并排除針筒中的氣泡；</p>

94、<p>　　5、溶劑瓶中的沙芯過濾頭容易破碎，在更換流動相時注意保護，當發(fā)現(xiàn)過濾頭變臟或長菌時，不可用超聲洗滌，可用5%稀硝酸溶液浸泡后再洗滌；</p><p>　　6、實驗結(jié)束后，一般先用水或低濃度甲醇水溶液沖洗整個管路30分鐘以上，再用甲醇沖洗。沖洗過程中關閉D燈、W燈；</p><p>　　7、關機時，先關閉泵、檢測器等，再關閉工作站，然后關機，最后自下而上關閉色譜儀各組

95、件，關閉洗泵溶液的開關；</p><p>　　8、使用者須認真履行儀器使用登記制度，出現(xiàn)問題及時向老師報告，不要擅自拆卸儀器。</p><p>　　第五章 高效液相色譜的應用</p><p>　　5.1色譜技術的聯(lián)用 </p><p>　　色譜是一種很好的分離手段，可以將復雜的混合物中的各個組分分離開，但它的定性、定結(jié)構(gòu)的能力較差。</

96、p><p>　　定性和定結(jié)構(gòu)的分析手段：質(zhì)譜（MS）、紅外光譜（IR）、紫外光譜（UV）、核磁共振波譜（NMR）、原子吸收光譜（AAS）、等離子發(fā)射光譜（ICP-AES）</p><p>　　早期采用的聯(lián)用手段：將色譜分離后的純物質(zhì)，收集起來后，經(jīng)過一些處理，再利用以上手段定性、定結(jié)構(gòu)，這種聯(lián)用稱為：脫機、非在線的聯(lián)用。</p><p>　　多維色譜技術：某一種色譜分離

97、模式往往很難將一個復雜的混合物中的所有組分都很好地分開，人們常采用將色譜未能完全分離的樣品收集起來，再有另一種分離模式的色譜進行分離。這是不同模式的色譜的聯(lián)用，這稱為多維色譜技術。</p><p>　　色譜-質(zhì)譜聯(lián)用：色質(zhì)聯(lián)用現(xiàn)在用得較多，氣質(zhì)聯(lián)用的儀器在國內(nèi)相當多的實驗室都有裝備。</p><p>　　色譜-原子光譜的聯(lián)用：原子光譜是指原子吸收和原子發(fā)射光譜法，這兩種分析方法主要用于金屬

98、或非金屬元素的定性、定量分析。色譜主要是用于有機化合物的分析、分離和提純。近年來，有關色譜和原子光譜聯(lián)用技術的研究報道在文獻中大量的出現(xiàn)。帶有火焰光度檢測器的氣相色譜儀就是最早的氣相色譜-原子光譜聯(lián)用儀器。</p><p>　　色譜-博里葉變換紅外光譜聯(lián)用：紅外光譜在有機化合物的結(jié)構(gòu)分析中有著很重要的作用。色譜是有機化合物分離、純化的最好方法。棱鏡或光柵型紅外光譜的掃描速度很慢，靈敏度也低，色譜與紅外光譜在線聯(lián)用

99、時，往往只能采用停流的方法，這種方法僅適合于氣相色譜和某些正相液相色譜，不適合反相液相色譜。</p><p>　　傅里葉變換紅外光譜出現(xiàn)后，由于掃描速度和靈敏度都有很大提高，解決了色譜和紅外光譜聯(lián)用時掃描速度慢的最大障礙，使色譜一傅里葉變換紅外光譜聯(lián)用有了很大進展。</p><p>　　5.2高壓液相色譜法的應用舉例</p><p>　　5.2.1在食品分析中的應用

100、 </p><p>　　食品中的營養(yǎng)物質(zhì)：有機酸、維生素、蛋白質(zhì)、氨基酸、脂肪等。</p><p>　　食品中的添加劑： 防腐劑、抗氧化劑、人工合成色素、甜味劑、保鮮劑等。</p><p>　　食品中的污染成份：由于環(huán)境污染，使食品沾污有害的微量元素、農(nóng)藥殘留、黃曲霉素等。</p><p>　　近年來高效液相色譜分析法在食品分析中的應用越來越

101、多，它比化學分析法的操作簡便、快速，并能提供更多的有用信息。</p><p><b>　　1、糖類的分離分析</b></p><p>　　食品中糖的含量是產(chǎn)品質(zhì)量控制的一個指標。糖類可分為單糖、寡糖和多糖。它們可以使用離子交換柱或胺基鍵合相柱進行分離。</p><p>　　使用反相鍵合相色譜柱可實現(xiàn)對淀粉水解的單糖和麥芽糖的分離。</p&

102、gt;<p>　　２、有機酸及酸味劑的分離分析</p><p>　　食品中的有機酸和酸味劑是食品酸味和鮮味的重要成份，也對食品的防腐保鮮起作重要作用。</p><p>　　如圖為白葡萄酒中酸味劑的分析譜圖（使用反相鍵合柱，流動相為0.0035mol/LH2SO4溶液）</p><p>　　3、維生素的分離分析</p><p>　

103、　人體所需的維生素雖然量不多，但不可缺少。而且大多數(shù)維生素來自于食品。其種類繁多，但結(jié)構(gòu)大相徑庭，可采用反相離子對色譜柱、反相鍵合色譜柱或胺基鍵合相柱實現(xiàn)分離分析。</p><p>　　4、食品添加劑的分離分析</p><p>　　食品添加劑是指在食品加工、生產(chǎn)、處理、包裝和保存等過程中，加入的保持食品營養(yǎng)價值、防止腐敗變質(zhì)、增強食品感官性狀，從而提高食品質(zhì)量的化學合成或天然物質(zhì)。<

104、/p><p>　　食品添加劑 的使用中，明確制定了衛(wèi)生標準，限定了食品添加劑的種類、名稱、應用范圍、最大作用量和殘留量。</p><p>　　食品添加劑主要有：防腐劑、抗氧化劑、甜（香）味劑、香料和天然或人工合成色素。</p><p>　　5、食品污染物的分析</p><p>　　食品中的有害有毒物質(zhì)來源通常有兩種途徑，一是由于環(huán)境污染造成的食品

105、污染，另一是在貯存、包裝或加工過程造成的污染。</p><p>　　例如黃曲霉素的分析。黃曲霉素是一類稠環(huán)類固醇化合物，有致癌作用，是食品污染物分析的重點。</p><p>　　黃曲霉素可以用正相吸附柱（如花生） ．反相鍵合相柱（如堅果．動物飼料．牛奶等）色譜分析。</p><p>　　黃曲霉素的分析過程一般為：</p><p>　　5.2

106、.2在環(huán)境污染分析中的應用 </p><p>　　高效液相色譜方法適用于對環(huán)境中存在的高沸點有機污染物的分析，如大氣．水土壤和食品中存在的多環(huán)芳烴．多氯聯(lián)苯．有機氯農(nóng)藥、有機磷農(nóng)藥、氨基甲酸酯農(nóng)藥、含氮除草劑、苯氧基酸除草劑、酚類、胺類、黃曲霉素、亞硝胺等。</p><p><b>　?。?、多環(huán)芳烴的檢測</b></p><p>　　多環(huán)芳烴（

107、ＰＡＨs）存在于工業(yè)和民用燃燒器、自動化排煙、煙草煙霧中，因有機燃料未完全燃燒而產(chǎn)生的，它還存在于礦物燃料、柴油燃料滲漏、雜酚油傾倒和供水管線的瀝青、煤焦油的襯層中。多環(huán)芳烴是可引起癌癥的有毒物質(zhì)，是環(huán)境監(jiān)測對象。</p><p><b>　　2、多氮聯(lián)苯的檢測</b></p><p>　　多氯聯(lián)苯是一種具有高絕緣性能的材料，多用作各種變壓器的絕緣介質(zhì)，在自然界難于降

108、解，所以多存在于土壤、河流底泥中。和多環(huán)芳烴一樣，ＰＣＢ也是一種全球性環(huán)境污染物，通過自然循環(huán)和食物鏈的富集機制，ＰＣＢ廣泛積蓄于各種生物體中，其對人類的主要危害是會引起癌變或畸變。</p><p><b>　　3、農(nóng)藥殘留的檢測</b></p><p>　　農(nóng)藥可分為殺菌劑、除草劑和殺蟲劑。由化學組成可分為有機氯農(nóng)藥、有機磷農(nóng)藥、氨基甲酸酯、含氮除草劑、苯氧羧酸除草

109、劑等。各種農(nóng)藥使用后殘留存在于土壤、水、植物體中，對不易降解的農(nóng)藥，經(jīng)食物鏈會在人體中聚集，從而造成對人體健康的危害。 </p><p>　　我們知道，有機氯農(nóng)藥在２０世紀５０～６０年代的廣泛使用已造成對人類居住環(huán)境的嚴重危害，現(xiàn)已禁用。</p><p>　　對不同的農(nóng)藥所使用的色譜柱和流動相差異較大，實驗條件也各不相同。</p><p>　　5.2.3其它

110、方面的應用 </p><p>　　１、在生物化學和生物工程中的應用</p><p>　　隨著生命科學和生物工程技術的迅速發(fā)展，人們對氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)及核堿、核苷、核苷酸、核酸等生物分子的研究興趣日益增加。這些生物活性分子是人類生命延續(xù)過程必須攝取的成份，也是生物化學、生化制劑、生物工程中進行蛋白質(zhì)純化、ＤＮＡ重組與修復等技術中的很需要研究對象，因此涉及它們的分離、分析問題也日益很重要。

111、</p><p>　　高效液相色譜中的反相色譜法、體積排阻色譜法、親和色譜法和離子色譜法都可用于以上多種生物分子的分離和分析。</p><p>　　2、在醫(yī)藥研究中的應用</p><p>　　如：人工合成藥物的純化及成份定性、定量測定，中草藥有效成份的分離、制備及純度測定等。</p><p>　　另外，臨床醫(yī)藥研究人體血液和體液中藥物濃度藥物

112、代謝的測定等。</p><p>　?。?、在精細化工分析中的應用</p><p>　　在精細化工生產(chǎn)中使用的具有較高分子量和較高沸點的有機化合物，如高碳婁脂肪族或芳香族的醇、醛和酮、醚、酸、酯等化工原料，以及各種表面活性劑、藥物、農(nóng)藥、染料、炸藥等工業(yè)產(chǎn)品，都可用高效液相色譜法進行分析。</p><p><b>　　總結(jié)</b></p>