桃蛀螟嗅覺相關(guān)基因的篩選與表達譜分析.pdf

1、昆蟲個體間以及昆蟲與環(huán)境間的交流主要依靠嗅覺和味覺來實現(xiàn)，其中嗅覺系統(tǒng)在長期的進化過程中，已經(jīng)發(fā)展成為高度專一、極其靈敏的化學(xué)檢測器，它能夠?qū)⑼饨鐐魅氲幕瘜W(xué)信號轉(zhuǎn)化為電信號，從而調(diào)節(jié)昆蟲的行為活動，如尋找食物、覓偶、寄主、棲息場所、產(chǎn)卵場所以及躲避不良環(huán)境等，因此對昆蟲的存活和繁殖起到重要作用。昆蟲對外界氣味分子的識別過程主要涉及到幾種蛋白，這些蛋白包括氣味結(jié)合蛋白、化學(xué)感受蛋白、氣味受體蛋白和氣味降解酶等。在害蟲防治過程中，這些蛋白可

2、作為新的靶標(biāo)，切斷任意一個環(huán)節(jié)，都可能破壞昆蟲對外界氣味分子的識別，從而影響其正?；顒?。桃蛀螟是農(nóng)林生產(chǎn)過程中危害十分嚴(yán)重的一種害蟲，而且寄主十分廣泛，每年都會造成巨大的經(jīng)濟損失。目前對桃蛀螟的防治主要采取化學(xué)防治，長期、大量的使用化學(xué)農(nóng)藥極易引發(fā)害蟲的抗藥性，因此需要尋找新的防治技術(shù)，特別是生物防治技術(shù)，以持續(xù)、有效的控制桃蛀螟的危害。本文通過構(gòu)建桃蛀螟觸角cDNA文庫，篩選出與嗅覺相關(guān)的基因，為進一步研究該基因的功能奠定了基礎(chǔ)，并為

3、桃蛀螟的生物防治提供了理論支持。主要研究結(jié)果如下:
　　 1.利用SMART技術(shù)構(gòu)建了桃蛀螟成蟲觸角的cDNA文庫，獲得1867條ESTs序列，利用生物信息學(xué)方法篩選出28個嗅覺相關(guān)蛋白基因，其中包括11個氣味結(jié)合蛋白基因，4個信息素結(jié)合蛋白基因，1個普通氣味結(jié)合蛋白基因，1個觸角結(jié)合蛋白基因，8個化學(xué)感受蛋白基因，3個氣味受體基因。
　　 2.首次克隆了桃蛀螟氣味受體蛋白基因CpunOrco的開放閱讀框（ORF）全長和

4、內(nèi)參基因β-actin部分序列，GenBank登錄號分別為為JX101681和JX119014。CpunOrco基因的開放閱讀框全長1425 bp，編碼475個氨基酸，序列中有7個跨膜區(qū)。利用熒光定量PCR技術(shù)分析CpunOrco基因在桃蛀螟雌雄蛾不同組織內(nèi)的表達譜，結(jié)果表明，CpunOrco基因在雌雄蛾觸角、喙、下顎須、足、腹部和胸部都表達，不同組織間以及雌雄蛾的表達量存在較大差異，主要在觸角和下顎須中表達，且雄蛾觸角中表達量高于雌蛾

5、觸角。
　　 3.利用半定量方法分析可溶性蛋白OBP和CSP在雌雄蛾不同組織的表達情況，結(jié)果顯示OBP和CSP主要在觸角中表達，CpunGOBP、CpunOBP1-5、CpunOBP10在下顎須中也有一定的表達，CpunOBP3-5、CpunOBP8-11在雄蛾觸角中的表達量遠(yuǎn)高于雌蟲。CSP的分布范圍比OBP廣，CpunCSP1-2、CpunCSP5-6、CpunCSP8在雌雄蛾各部位都表達，以觸角中的表達量最高。CpunCS