種植年限對(duì)牡丹根際土壤微生物群落結(jié)構(gòu)的影響.pdf

1、牡丹(Paeonia suffruticosa)為芍藥屬落葉小灌木。是我國(guó)的傳統(tǒng)名貴花卉之一，主要產(chǎn)于山東菏澤和河南洛陽等地。隨著種植年限增加，病原微生物的不斷積累，牡丹土傳病害有逐年加重的趨勢(shì)。導(dǎo)致牡丹花的質(zhì)量與丹皮產(chǎn)量普遍下降的現(xiàn)象。連作障礙現(xiàn)象嚴(yán)重影響丹皮的產(chǎn)量和花的質(zhì)量和牡丹的產(chǎn)業(yè)化。
　　 為了探究不同種植年限牡丹根際微生物群落結(jié)構(gòu)變化，從菏澤曹州牡丹園采集4個(gè)分別為3、5、8、12年的牡丹根際土壤樣品，結(jié)合末端限制性

2、片段長(zhǎng)度多態(tài)性(T-RFLP)技術(shù)與變性梯度凝膠電泳(DGGE)方法研究了樣品中細(xì)菌和真菌的種群結(jié)構(gòu)變化，探究牡丹連作對(duì)土壤微生物種群結(jié)構(gòu)的影響。
　　 T-RFLP群落圖譜分析表明牡丹的根際土壤中細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)多樣性水平隨著牡丹的連作而逐漸降低。牡丹根際細(xì)菌種群主要有Firmicutes/Bacilli，Bacteroidetes/Sphingobacteria，F(xiàn)irmicutes/Clostridia，Actinobacte

3、ria。用Bio-Dap軟件進(jìn)行了每個(gè)樣品多樣性指數(shù)的計(jì)算，結(jié)果表明牡丹的連作使牡丹根際細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)趨于簡(jiǎn)單。
　　 對(duì)牡丹根際土壤的細(xì)菌與真菌DGGE圖譜分析表明，各樣品間細(xì)菌種群結(jié)構(gòu)相似度隨著種植年限增加而降低，牡丹根際土壤樣品真菌種群結(jié)構(gòu)相似度呈現(xiàn)相同趨勢(shì)，說明隨著種植年限增加牡丹根際微生物種群結(jié)構(gòu)發(fā)生較大變化，結(jié)構(gòu)趨于簡(jiǎn)單，多樣性水平逐年降低。
　　 對(duì)DGGE條帶測(cè)序結(jié)果的分析表明，M1與Halomonas m

4、agadiensis(X92150.1)相似性達(dá)到98％，M2與Pseudomonas taiwanensis(EU103629.2)相似性達(dá)到99％，M6與Flavobacteriumdaejeonense(DQ222427.1)相似性達(dá)到100％，M8與Mesorhizobium metallidurans(AM930381.2)相似性達(dá)到98％，M9與Cellvibrio gandavensis(AJ289162.1)相似性達(dá)到9

5、7％，其它條帶為不可培養(yǎng)微生物，上述菌屬數(shù)量均隨著種植年限的增加而逐漸減少。
　　 從根際土壤中分離得到300個(gè)分離物，以牡丹根腐病病原菌茄腐鐮刀菌(Fusarium solani)為靶標(biāo)菌，通過平板對(duì)峙法篩選到27個(gè)具有拮抗性能的菌株，其中MD1，MD4，MD7，MD8，MD64，MD68，MD70具有較強(qiáng)拮抗能力，且拮抗性能穩(wěn)定。經(jīng)過形態(tài)觀察、生理生化特征分析及16SrDNA序列分析。將MD1鑒定為Bacillus amyl

6、oliquefaciens，MD4鑒定為Bacillus malacitensis，MD7鑒定為Bacillus subtilis，MD8鑒定為Pseudomonas chlororaphis；MD64鑒定為Streptomyces albireticuli；MD68鑒定為Bacillus tequilensis；MD70鑒定為Bacillus methylotrophicus。它們的16SrDNA序列在GenBank中注冊(cè)號(hào)分別為JN