與茶樹類黃酮合成相關(guān)的MYB轉(zhuǎn)錄因子的克隆及表達研究.pdf

1、茶多酚是茶樹[Camelliasinensis(L.)0.Kuntze]中主要的類黃酮次生代謝產(chǎn)物，具有重要的生理生化作用。涉及類黃酮生物合成的基因有兩類：編碼相關(guān)合成酶的結(jié)構(gòu)基因和編碼轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控基因。轉(zhuǎn)錄因子具有調(diào)控結(jié)構(gòu)基因表達的功能。MYB轉(zhuǎn)錄因子參與調(diào)控苯丙烷類次生代謝途徑，是植物中最大的轉(zhuǎn)錄因子家族之一。
　　 為了明確MYB轉(zhuǎn)錄因子在茶樹類黃酮物質(zhì)合成中的作用，本研究克隆了茶樹中3個MYB轉(zhuǎn)錄因子，對其進行了牛物信

2、息學(xué)分析；利用實時熒光定量技術(shù)，分析了3個MYB基因的差異表達；構(gòu)建了原核表達載體，表達了目的蛋白；構(gòu)建了表達載體，侵染擬南芥和煙草，進行3個MYB基因功能的初步分析。
　　 主要研究結(jié)果如下：
　　 1.從NCBI、安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)茶樹轉(zhuǎn)錄組中篩選得到一些可能參與酚類物質(zhì)合成調(diào)控的候選cDNA，利用RACE技術(shù)，克隆得到茶樹CsMYB4-5、CsMYB4-6和CsMYB4-7基因全長。
　　 2.生物信息學(xué)分析結(jié)果

3、：蛋白理化性質(zhì)分析顯示CsMYB4-5、CsMYB4-6和CsMYB4-7蛋白均為不穩(wěn)定蛋白和親水性蛋白；一級結(jié)構(gòu)分析顯示3個基因都定位在細胞核且都不存在信號肽；二級結(jié)構(gòu)分析表明，3個蛋白均以a螺旋為主，并通過長鏈轉(zhuǎn)角連接起來，符合MYB蛋白折疊成螺旋-轉(zhuǎn)角-螺旋(helix-turn-helixHTH)的特征結(jié)構(gòu)；三級結(jié)構(gòu)分析表明，3個蛋白質(zhì)的三級結(jié)構(gòu)都很簡單，由6個a-螺旋條帶簡單的纏繞在無規(guī)則卷曲線上；分子系統(tǒng)進化分析表明CsMY

4、B4-5與金魚草中的AmMYB330一致性為48.45％，CsMYB4-6與金魚草中的AmMYB308一致性為69.80％，與AtMYB4的一致性為62.41％；CsMYB4-7與柿子中的DkMYB4一致性為64.12％，CsMYB4-5、CsMYB4-6與擬南芥第四亞組的AtMYB3、AtMYB4、AtMYB7及AtMYB32在同一進化分支。且比對結(jié)果顯示CsMYB4-5、CsMYB4-6具有C1和EAR基序。
　　 3.利用

5、實時熒光定量PCR技術(shù)檢測了三個基因在茶樹不同器官、不同發(fā)育時期葉片組織中的表達水平，結(jié)果顯示，CsMYB4-5和CsMYB4-6兩個基因均在根中高表達，在莖中低表達；但是隨著葉片伸展發(fā)育，兩個基因的表達趨勢并不完全相同。而CsMYB4-7在根中低表達，在莖中高表達。另外，還檢測了三個基因在植物激素GA和ABA和傷害處理1小時和48小時后的表達水平，結(jié)果表明，只有CsMYB4-7對GA和ABA和傷害處理產(chǎn)生了2倍以上的表達差異，其余兩個