共表達豬細(xì)小病毒VP2和豬圓環(huán)病毒2型Cap的重組偽狂犬病毒的構(gòu)建及其鑒定.pdf

1、偽狂犬病毒(PseudorabiesVires，PKV)、豬細(xì)小病毒(Porcineparvovirus，PPV)、豬圓環(huán)病毒2型(PorcinecircovirusType2，PCV2)是危害當(dāng)今養(yǎng)豬業(yè)的三種重要病原，分別引起豬的偽狂犬病、豬細(xì)小病毒病與豬圓環(huán)病毒2型病。豬偽狂犬病和豬細(xì)小病毒病是以引起豬群發(fā)生繁殖障礙為特征的傳染病，在我國很多豬場流行，嚴(yán)重制約了養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展。豬圓環(huán)病毒2型與豬多種疾病綜合征有關(guān)，尤以仔豬斷奶后多系統(tǒng)

2、衰弱綜合征危害最大，目前呈世界性分布，給養(yǎng)豬業(yè)生產(chǎn)造成了巨大的經(jīng)濟損失。
　　 偽狂犬病毒具有宿主范圍廣、不感染人、基因組容量大，含多個可缺失的非必需基因、重組病毒穩(wěn)定的特點，加之豬偽狂犬病病毒基因缺失疫苗的成功應(yīng)用，以PRV為載體表達其它病原主要免疫原性蛋白質(zhì)構(gòu)建重組偽狂犬病毒成為基因工程疫苗的研究熱點，尤以PRV-Bac系統(tǒng)最為便捷。
　　 本研究在TK基因缺失的PRVZJ株Bac的基礎(chǔ)上插入PPVVP2和PCV2C

3、ap基因，旨在研制PRV、PPV、PCV2三聯(lián)基因工程疫苗，通過口蹄疫病毒2A基因?qū)PVVP2基因和PCV2Cap基因串聯(lián)，得到VP2-2A-Cap(V2C)基因，將其插入pEP-CMV-in轉(zhuǎn)移載體構(gòu)建pEP-V2C-in重組表達質(zhì)粒，再通過RedE/T兩步重組法構(gòu)建了pVRV-V2C-△gE和pPRV-△gE突變體，該突變體用磷酸鈣法轉(zhuǎn)染BHK-21細(xì)胞獲得重組病毒rPRV-V2C-△gE和rPRV-△gE。Westernblot