標記基因刪除系統(tǒng)的構(gòu)建及Bt殺蟲基因在轉(zhuǎn)基因水稻中的應(yīng)用.pdf

1、水稻（Oryza sativa）是我國最重要的糧食作物，其產(chǎn)量的高低直接關(guān)系著我國糧食安全問題。近年來，利用基因工程方法導入蘇云金桿菌(Bacillus thuringiensis，Bt)來源的殺蟲基因，培育水稻抗蟲新品種，已成為提高水稻產(chǎn)量的重要手段。
　　 在植物的遺傳轉(zhuǎn)化過程中，通常會借助編碼抗生素或除草劑抗性的標記基因從大量的非轉(zhuǎn)化細胞中篩選出正確的轉(zhuǎn)化子，以保證轉(zhuǎn)化的高效率。然而，一旦獲得陽性轉(zhuǎn)基因植物，這些抗性基因的

2、存在就會變得多余，有可能給環(huán)境或人畜帶來某些潛在危害。因此，建立良好的標記基因刪除體系，培育不帶標記基因的轉(zhuǎn)基因作物逐漸發(fā)展為轉(zhuǎn)基因植物安全保障領(lǐng)域的一個重要研究課題。
　　 本研究在構(gòu)建標記基因刪除系統(tǒng)及其應(yīng)用于轉(zhuǎn)Bt殺蟲基因水稻中有如下創(chuàng)新工作:
　　 1、以雙價抗蟲基因植物表達載體pCMUASV和位點特異性重組系統(tǒng)Cre/loxP為基礎(chǔ)，利用Red/ET重組技術(shù)成功構(gòu)建了兩個含標記基因刪除系統(tǒng)的植物表達載體pLCM

3、UASV-napc和pLCMUASV-OsMc。
　　 2、應(yīng)用農(nóng)桿菌介導法將兩個植物表達載體導入到粳稻品種日本晴中，得到23個轉(zhuǎn)基因株系，經(jīng)PCR鑒定均為陽性，表明Bt殺蟲基因和標記基因刪除系統(tǒng)已成功整合到水稻基因組中。
　　 3、15個轉(zhuǎn)基因株系的T1代種子進行抗性萌發(fā)實驗，統(tǒng)計結(jié)果顯示分離比例不符合孟德爾遺傳定律，表明在部分植株中潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶(hygromycin phosphotransferase，hpt)