黃瓜土傳枯萎病拮抗菌的篩選鑒定及其生物學(xué)效應(yīng)研究.pdf

1、黃瓜是一種重要的世界性蔬菜，也是中國種植面積最大的蔬菜之一。隨著黃瓜生產(chǎn)環(huán)境的變化，病蟲害問題顯得十分突出。黃瓜土傳枯萎病是一種土傳病害，由致病性的尖孢鐮刀菌黃瓜?；虵usarium.oxysporum f.sp.cucumerinum J.H.Owen(FOC)引起的，是黃瓜病害中危害最為嚴(yán)重、造成經(jīng)濟(jì)損失最大的病害之一。目前，藥劑防控是控制黃瓜土傳枯萎病的重要方法，但是由于缺乏高效、低毒，無污染的殺菌劑，易造成農(nóng)藥殘留，危害人們的

2、身體健康，而且由于枯萎病為土傳病害，難以實行大面積的土壤藥劑處理，成本也高。作為綜合防控黃瓜土傳枯萎病的方法之一，生物防控正日漸受到人們的關(guān)注。
　　 本研究對黃瓜土傳枯萎病高效拮抗菌進(jìn)行了篩選、鑒定，研究其最佳發(fā)酵條件，并通過PCR的方法對其含有的抗生素合成基因進(jìn)行了擴(kuò)增，對產(chǎn)生拮抗物質(zhì)的條件進(jìn)行了研究，并測定了拮抗物質(zhì)的穩(wěn)定性，最后將拮抗菌與有機(jī)肥進(jìn)行二次發(fā)酵形成微生物有機(jī)肥，通過盆栽試驗研究了其生防效果與抗病機(jī)理。主要結(jié)果

3、如下:
　　 (1)從黃瓜根際土壤中分離出113株形態(tài)不同的菌株，經(jīng)過初篩，共得到35株對黃瓜土傳枯萎病病原菌具有拮抗效果的菌株;經(jīng)過復(fù)篩得到11株抑菌效果較好的菌株，其抑菌率均達(dá)到50.0％以上，其中，菌株WQJ-100的拮抗效果比較好，且比較穩(wěn)定，其對尖孢鐮刀菌的抑菌率達(dá)到了63.6％。通過形態(tài)特征觀察和生理生化鑒定，結(jié)合16S rRNA基因同源性序列分析，初步將菌株WQJ-100鑒定為死谷芽孢桿菌(Bacillus val

4、lismortis)。
　　 (2)菌株WQJ-100對甜瓜枯萎病、棉花黃萎病、辣椒疫病等病原菌均具有較好的抑菌作用，抑菌率均可達(dá)到60.0％以上;其中對棉花黃萎病病原菌抑菌率最高，為75.8％。
　　 (3)通過PCR方法檢測出死谷芽孢桿菌WQJ-100的基因組中含有fenB、bam和ituA、ituB、ituC、ituD基因，它們分別是Fengycin、Bacillomycin和Iturin的生物合成相關(guān)基因。

5、>　　 (4)菌株WQJ-100生長的最佳發(fā)酵條件為:搖床轉(zhuǎn)速180 r·min-1、培養(yǎng)溫度40℃、裝液量為10 mL/250 mL、NaCl濃度為0、初始pH7、接種量2％、以蔗糖作為碳源、以蛋白胨作為氮源。菌株WQJ-100在LB培養(yǎng)基中產(chǎn)拮抗物質(zhì)的最佳條件為:培養(yǎng)時間72 h、搖床轉(zhuǎn)速為180 r·min-1、初始pH7、培養(yǎng)溫度35℃、裝液量50mL/250mL瓶、接種量為1％。
　　 (5)從死谷芽孢桿菌WQJ-1

6、00的發(fā)酵液中提取的抗菌粗提物在pH為3-9范圍內(nèi)較穩(wěn)定，pH對抑菌活性影響不大;其對紫外線照射比較穩(wěn)定，經(jīng)不同時間的紫外線照射后，其抑菌活性改變甚微;抗菌粗提物在80℃以下處理后活性改變甚微，而在100℃以上處理后活性明顯下降;其對胰蛋白酶部分敏感，對蛋白酶K及胃蛋白酶比較穩(wěn)定。
　　 (6)盆栽試驗結(jié)果表明，施用由拮抗菌株WQJ-100和有機(jī)肥制備的微生物有機(jī)肥BIO，黃瓜土傳枯萎病的發(fā)病率只有15.0％，防控效果達(dá)到80.

7、7％。
　　 (7)微生物有機(jī)肥可顯著促進(jìn)黃瓜的生長。黃瓜移栽60 d后，CK、有機(jī)肥(OF)BIO間的地上部及地下部干、鮮重均有顯著性差異，并且都表現(xiàn)為BIO最大，OF次之。BIO的單果干、鮮重也顯著高于CK及OF處理。施用BIO還可以顯著提高黃瓜葉片葉綠素的含量及光合速率、蒸騰系數(shù)、氣孔導(dǎo)度等跟光合作用有關(guān)的參數(shù)，從而提高了光合作用效率，促進(jìn)植物生長。同時，施用BIO還能顯著提高根系長度及根系活力，促進(jìn)植株更快生長。