利用轉(zhuǎn)基因策略培育抗真菌病害水稻的研究.pdf

1、水稻是重要的糧食作物，而稻瘟病嚴(yán)重影響了水稻產(chǎn)量。目前我國(guó)防治稻瘟病主要采用選擇抗病豐產(chǎn)品種結(jié)合藥劑防治的策略，但稻瘟病菌具有復(fù)雜的變異性，很多抗病品種在推廣種植3-5年后均變?yōu)榱烁胁∑贩N。
　　 鑒于以上情況，本研究的目的是:1.將多個(gè)抗稻瘟病基因聚合到一個(gè)可轉(zhuǎn)化人工染色體(TAC)載體上并進(jìn)行水稻轉(zhuǎn)化，期望獲得持久高抗的新品種。2.通過轉(zhuǎn)基因方法，將白藜蘆醇合酶(RS)基因?qū)胨荆Ｍ浞€(wěn)定表達(dá)并積累具有廣譜抗菌效果的產(chǎn)物

2、白藜蘆醇，開拓水稻抗病的新渠道。
　　 利用Cre/loxP介導(dǎo)的多基因聚合系統(tǒng)將目的基因通過重組交換逐個(gè)添加到TAC載體中，運(yùn)用此方法本研究得到:
　　 1.含有3個(gè)廣譜抗瘟性基因(Pid2，Pi37和Pi2)的雙T區(qū)聚合載體以及8個(gè)有后續(xù)使用價(jià)值的中間載體;
　　 2.通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化將雙基因聚合載體（含Pid2和Pi37基因）轉(zhuǎn)入粳稻品種中花11。經(jīng)過轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性檢測(cè)、T區(qū)通讀檢測(cè)及基因表達(dá)量檢測(cè)，篩

3、選出雙T區(qū)獨(dú)立轉(zhuǎn)化，同時(shí)具有高表達(dá)量的雙基因陽(yáng)性轉(zhuǎn)化苗，有待后期抗病檢測(cè)。
　　 白藜蘆醇是一種植物抗毒素，具有天然抗菌活性?；诖嗽颍狙芯繉碓从趦蓚€(gè)葡萄品種的白藜蘆醇合酶基因以組成型表達(dá)的強(qiáng)啟動(dòng)子Ubiquitin驅(qū)動(dòng)，并利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化引入水稻粳稻品種中花11中，獲得以下主要結(jié)果:
　　 1.對(duì)轉(zhuǎn)基因水稻PCR陽(yáng)性檢測(cè)、Southern blot檢測(cè)和發(fā)芽試驗(yàn)后，得到8個(gè)T1代單拷貝純合株系;
　

4、　 2.檢測(cè)轉(zhuǎn)基因單拷貝家系基因表達(dá)量發(fā)現(xiàn)，大多數(shù)家系的外源基因可穩(wěn)定表達(dá);
　　 3.HPLC-MS檢測(cè)轉(zhuǎn)基因表達(dá)終產(chǎn)物證實(shí)，最終產(chǎn)物不是白藜蘆醇，而是白藜蘆醇苷（亦稱為云杉心苷），最高檢出量達(dá)到了10.26μg/g FW，是野生型對(duì)照的1000倍，推測(cè)這是在生成白藜蘆醇的基礎(chǔ)上，水稻內(nèi)源的糖基轉(zhuǎn)移酶作用的結(jié)果;
　　 4.經(jīng)抗病檢測(cè)發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因植株對(duì)稻瘟病菌并沒有產(chǎn)生明顯的抗性，但是高含量的云杉心苷可以提升水稻潛在的