抗凍基因KN2表達(dá)載體的構(gòu)建及大麥遺傳轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、大麥(Hordeum vulgareL.)是世界重要的糧食作物，在全球范圍內(nèi)廣泛種植，是啤酒和飼料的主要原料。經(jīng)過近十年的發(fā)展，大麥基因工程研究得到了廣泛的應(yīng)用，在大麥品質(zhì)改良、抗病研究和抗脅迫等領(lǐng)域獲得了很多具有積極意義的成果。近年來，全球氣候變化無常，自然災(zāi)害頻繁發(fā)生，其中凍害已經(jīng)對(duì)大麥的生產(chǎn)造成了嚴(yán)重的影響，隨著轉(zhuǎn)基因技術(shù)的發(fā)展，將優(yōu)良的外源抗凍基因轉(zhuǎn)化到大麥中去，可顯著提高大麥的抗凍性。本研究以不同大麥品種為材料建立了大麥幼胚再

2、生體系，構(gòu)建了高效的抗凍基因KN2表達(dá)載體，并且對(duì)其進(jìn)行了遺傳轉(zhuǎn)化研究。得到的研究結(jié)果如下:
　　 (1)以4個(gè)大麥品種（美里黃金，Golden promise，華大麥4號(hào)，華大麥7號(hào)）的幼胚為試驗(yàn)材料，建立了大麥再生體系并對(duì)比了這四個(gè)品種之間的差異。研究結(jié)果表明:這四個(gè)品種的離體培養(yǎng)效果都很好，均可作為遺傳轉(zhuǎn)化的受體，誘導(dǎo)培養(yǎng)基中添加0.2mg/L的ABA對(duì)胚性愈傷組織的形成和再分化有促進(jìn)作用。
　　 (2)以植物表達(dá)

3、載體pCAMBIA33011為基礎(chǔ)，通過在引物的兩端分別設(shè)計(jì)酶切位點(diǎn)KpnI和BamHI，采用T-simple載體與擴(kuò)增的目的基因KN2連接。分別酶切帶有目的基因的T載體和高效表達(dá)載體pCAMBIA33011，膠回收酶切產(chǎn)物并連接，得到含抗凍基因KN2的高效表達(dá)載體pCAMBIA33011K，并將其導(dǎo)入農(nóng)桿菌AGL1菌株，為農(nóng)桿菌介導(dǎo)的抗凍基因KN2遺傳轉(zhuǎn)化研究夯實(shí)了基礎(chǔ)。
　　 (3)農(nóng)桿菌介導(dǎo)大麥的遺傳轉(zhuǎn)化研究:試驗(yàn)中以美里