桿狀病毒AcMNPV體內(nèi)、體外復(fù)制時基因組的變化.pdf

1、　　本研究以桿狀病毒模式種苜蓿丫紋夜蛾核多角體病毒(AcMNPV)的細(xì)菌人工染色體(AcBAC)為研究對象。AcBAC既能感染宿主，也可以象質(zhì)粒一樣在E.coli中復(fù)制，因此可簡單、快速獲得基因型均一的子代病毒。但AcBAC的多角體基因已被插入失活，為了使其具有口服感染性，本研究通過位點(diǎn)特異性重組，構(gòu)建了能夠產(chǎn)生多角體的重組病毒AcBACph作為本研究的實(shí)驗(yàn)材料。AcBACph在體外(Hi-5細(xì)胞和Sf-9細(xì)胞)、體內(nèi)(四齡粉紋夜蛾幼蟲

2、)中進(jìn)行連續(xù)傳代時產(chǎn)生了多種子代病毒突變株。利用BAC-AcMNPV-E.coli研究平臺和RFLP技術(shù)對體內(nèi)、體外的第1，5，10代子代病毒進(jìn)行REN分析：AcBACph在Hi-5細(xì)胞中和四齡粉紋夜蛾幼蟲中連續(xù)傳代后，所產(chǎn)生的子代病毒共有的基因組區(qū)域、基因組的平均大小、完整基因型所占比例都很相似；它們的第l代子代病毒包含較多病毒突變株，基因組序列完整的病毒株僅占6％(Hi-5)和2％(Tn幼蟲)，第5代的完整病毒株占52％(Hi-5)

3、和87％(Tn幼蟲)，第10代的完整病毒株占82％(Hi-5)和83％(Tn幼蟲)。AcBACph在Sf-9細(xì)胞中連續(xù)傳代后，病毒基因組的變化模式卻有所不同，第一代、第五代、第十代完整病毒株所占比例分別是：3％、2％、3％。無論在體外還是體內(nèi)傳代時，PstI-Dl、PstI-D2、PstI-N均存在于子代病毒基因組中。某些突變株具有超摩爾帶，例如：PstI-D2、PstI-I,、PstI-J，并且這些超摩爾帶均具有復(fù)制原點(diǎn)。應(yīng)用TCID