麝香百合、矮牽牛DREB家族基因的克隆與表達分析.pdf

1、麝香百合(Lilium longiflorum)花姿雅致、氣質(zhì)純潔高貴，是深受人們喜愛的重要鮮切花之一。但它喜濕潤微酸性土壤，不耐寒，冬季需在保護地或溫室中栽培，生產(chǎn)成本很高。矮牽牛(Petunia hybrida Vilm)以其姿態(tài)各異、顏色豐富的特點成為了裝點城市的重要花卉之一。然而，雖然矮牽牛應用極為廣泛，但是它不耐澇、不耐寒的生長習性，也很大程度上損害了其觀賞價值并限制了其應用范圍。
　　 DREB轉(zhuǎn)錄因子是一類可以特異

2、性結合下游抗逆相關基因的啟動子部位，激活下游一系列抗性基因表達的蛋白質(zhì)，由于這種轉(zhuǎn)錄因子能從整體上提高植物的抗性，所以備受研究者親睞。為了培育抗性強的麝香百合新品種，并對矮牽牛不耐寒性狀進行初步的分子水平研究，本研究通過綜合前人的研究經(jīng)驗，利用同源克隆法從麝香百合(Lilium longiflorum)、膨大矮牽牛(Petunia inflata)以及腋花矮牽牛(Petunia axillaris)中克隆得到DREB基因，并對這些基因在

3、不同的脅迫條件下的表達情況進行了半定量分析，對其中有些基因構建了相關的表達載體。主要研究成果如下：
　　 1.通過同源克隆結合RACE以及TAIL技術，在低溫脅迫的麝香百合葉片中擴增到了兩個不同大小的DREB1類同源基因的全長，命名為LlDREB1-1和LlDREB1-2，研究發(fā)現(xiàn)這兩個基因編碼的氨基酸與棕櫚科等植物同源基因編碼的氨基酸同源性最高。從膨大矮牽牛(S6)以及腋花矮牽牛(S26)葉片中擴增得到6個DREB1類和2個D

4、REB2類基因全長，分另為PaDREB1a、PiDREB1b、PiDREB1c、PiDREB1f、PiDREB1i、PaDREB2a和PaDREB2C。
　　 2.對麝香百合中擴增到的DREB1類同源基因進行了半定量表達分析，觀察了在低溫、干旱和高鹽脅迫下，該類基因的表達變化情況。實驗發(fā)現(xiàn)LlDREB1基因在低溫下的表達持續(xù)時間長達4天，且在24h時表達量達到最高值。在干旱和高鹽脅迫下，該基因也有短暫表達，但只能維持2h。同時選

5、取了3個矮牽牛DREB1基因進行表達分析，分別為PiDREB1c，PiDREB1f和PiDREB1i，研究發(fā)現(xiàn)這三個基因在低溫脅迫下的表達模式相似，都能被低溫誘導，但只能維持3h內(nèi)的高豐度表達，3h后基因表達則迅速減少，其中PiDREB1i表達更為滯后一些，表達量相對低一些。
　　 3.構建了麝香百合2個DERB1同源基因的正義表達載體35S：：LlDREB1-1和35S：：LlDREB1-2，并且構建了膨大矮牽牛和腋花矮牽牛正