OsDCL3b基因沉默對穗生長發(fā)育的影響.pdf

1、Dicer是一種高度保守的核糖核酸酶,在植物中稱為Dicer-like(DCL)蛋白。Dicer/DCL的直接生物學(xué)功能主要是加工生成各種具有調(diào)控功能的小分子RNA,這些調(diào)控小RNA進(jìn)一步影響其他相關(guān)蛋白基因的時空表達(dá),進(jìn)而影響生物個體的生長發(fā)育、抗病蟲害能力和逆境適應(yīng)能力等。因而,研究Dicer/DCL蛋白基因的功能對揭示真核生物的基因表達(dá)調(diào)控機(jī)理具有十分重要的意義。
　　 本研究基于RNA干擾技術(shù),對水稻OsDCL3b進(jìn)行了

2、轉(zhuǎn)基因沉默分析,獲得了影響稻穗生長發(fā)育的T2代轉(zhuǎn)基因陽性純合植株,發(fā)現(xiàn)OsDCL3b基因主要影響21nt和24nt大小的小RNA的生物合成,為深入研究OsDCL3b基因調(diào)控稻穗生長發(fā)育的遺傳途徑奠定了基礎(chǔ)。
　　 主要結(jié)果如下:
　　 1、基于改造了的RNAi-Ubi質(zhì)粒pYL,成功構(gòu)建了OsDCL3b的轉(zhuǎn)基因沉默載體,利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化水稻中花11,獲得了轉(zhuǎn)基因T2代陽性純合株系。
　　 2、熒光定量PCR比較

3、分析發(fā)現(xiàn),OsDCL3b基因在其中2個T2代轉(zhuǎn)基因純合株系DCL4-6和DCL6-1幼穗中的表達(dá)量分別比其在野生型中花11幼穗中的表達(dá)量減少了約30％和70%;大田種植成熟期表型分析結(jié)果表明,這2個T2代轉(zhuǎn)基因純合株系植株的結(jié)實率分別只有40.0%和37.7%,而野生型中花11的結(jié)實率高達(dá)91.7%,同時這2個T2代轉(zhuǎn)基因純合株系植株的每穗枝梗數(shù)和總粒數(shù)變少,穗長變短;表明OsDCL3b基因與稻穗的生長發(fā)育密切相關(guān)。
　　 3、